| 研究概要 |
HDL-C>120mg/dlの著しい高HDL血症を呈しながらcommonな既知cholesteryl ester transfer protein(CETP)遺伝子変異が証明されない症例(n=5)について,稀な遺伝子型であるInt14T,Q309X,G181Xの検索とCETP活性測定を行った.いずれの症例もコントロールより低いCETP活性を認めたが,既知の変異型は検出されなかった.このことから,未知CETP変異の可能性が示唆されたので,CETP遺伝子の全エクソンとエクソン/イントロン境界部についてPCR産物の直接DNAシークエンシングを行ったが,検索いえた範囲ではどの患者のDNA配列にも異常を見いだせなかった.この結果の意味するところは,大きな欠失または挿入により異常DNA鎖がPCR増幅されなかったか,CETP遺伝子の上流の調節域に異常がある可能性が考えられる.この問題を明らかにするために,現在我々は,上記患者のゲノムに対してCETP遺伝子cDNAをプローブとするサザンブロッティング,更には,上流および下流のDNAシークエンスを行っている.
血中Phospholipid Transfer Protein(PTP)については,蛍光色素による活性測定の系を作製した.活性の比較的低い症例で,PTP遺伝子のPCR産物の直接DNAシークエンシングを行ったが,PTP遺伝子変異は見いだせなかった.今後は,抗CETP抗体を添加するなどの方法を試みて活性測定の信頼性を向上し,PTP活性低下症例を多くスクリーニングして遺伝子解析を継続する必要がある.
リンパ球のHDL-binding protein活性測定のために,蛍光色素FITCを用いて正常HDLを標識し培養リンパ球と混和後,フローサイトメトリーに供した.正常者リンパ球で平均約20%が蛍光陽性となる条件で既知のCETP遺伝子変異を有しない高HDL血症患者(n=5)からのリンパ球について検討を行ったところ,患者リンパ球の陽性率は正常コントロールと有意な差を認めなかった.今後も更にスクリーニングを継続する予定である.
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