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PCR-SSP法による血痕、毛髪からのHLA class IIタイピングについて

研究課題

研究課題/領域番号 08670477
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 法医学
研究機関千葉大学

研究代表者

木内 政寛  千葉大学, 医学部, 教授 (30009683)

研究分担者 佐藤 彌生  千葉大学, 医学部, 助手 (70009679)
研究期間 (年度) 1996
研究課題ステータス 完了 (1996年度)
配分額 *注記
900千円 (直接経費: 900千円)
1996年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
キーワードPCR-SSP / HLA class II / DNA Typing / 血痕 / 毛髪
研究概要

血痕、毛髪からpolymerase chain reaction-sequence specific primers(PCR-SSP)法によりHLA class II DNAタイピングを試みた。
DNAは型既知の血痕ガ-ゼ1cm^2からphenol/chloroform抽出し、Microcon^<TM>100 ultrapurification device(Amicon)で濃縮精製しprimerはDYNAL^<【○!R】>DQB1-SSP 1st setとDYNAL^<【○!R】>DR"low-resolution"-SSP(DYNAL)を用い、PCRを35サイクル行った結果DNA量0.1ng/PCRreaction mixture以上でタイピングが可能であった。PCRに用いる酵素をAmpliTaq^<【○!R】>DNA polymerase(Perkin Elmer),AmpliTaq^<【○!R】>+native Pfu DNA polymerase(Stratagene)(25:1),AmpliTaq^<【○!R】>Gold(Perkin Elmer)で比較した結果AmpliTaq^<【○!R】>Goldが収量、正確性の点で一番効果的であった。この酵素は低温度領域でのミスアニーリングを防ぐ目的で高温で活性化するようにデザインされている(hotstart)。PCR inhibitor,false positive,extra band等はMicrocon^<TM>100を用いた精製とAmpliTaq^<【○!R】>Goldを用いたhotstart PCRの導入により殆ど解決された。血痕全例で新鮮血の型と一致し長期保存血痕(10〜20年)もタイピングできた。
毛髪は毛根部と毛幹部に分け血痕と同様に操作し、PCRは40サイクル行った。DNA量10pg/PCR reaction mixtureで検出が可能であった。毛根部0.5cmを5本使用したときは全例、毛幹部5〜10cmからは約半数がタイピングできた。毛髪1本では毛根鞘の多く付着したものはタイピングできた。毛幹全例が検出可能になる方法を確立することが今後の課題であるが、この研究によりPCR-SSP法で血痕、毛髪のHLA class IIタイピングが可能であることを証明した。

報告書

(1件)
  • 1996 実績報告書
  • 研究成果

    (3件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (3件)

  • [文献書誌] Yayoi SATO: "DNA Typing for HLA-DR from Bloodstain Using PCR with Sequence-Specific Primers (PCR-SSP)" Proceeding of the 14th Meeting of the International Association of Forensic Science. (in press).

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] 佐藤彌生: "PCR-SSP法による血痕のHLA class IIタイピング" 日本法医学雑誌. 50(補冊). 83- (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] 佐藤彌生: "PCR-SSP法による毛髪のHLA-DQB1タイピング" 日本法医学雑誌. 51(補冊). 115 (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書

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公開日: 1996-04-01   更新日: 2016-04-21  

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