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血中薬物濃度からの中毒レベルの意義付けと毒性発現に関与する遺伝子からの意義付け

研究課題

研究課題/領域番号 08670487
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 法医学
研究機関鳥取大学

研究代表者

池淵 淳  鳥取大学, 医学部, 助手 (30150361)

研究分担者 入澤 淑人  鳥取大学, 医学部, 教授 (90112226)
湯浅 勲  鳥取大学, 医学部, 講師 (00093633)
研究期間 (年度) 1996 – 1997
研究課題ステータス 完了 (1997年度)
配分額 *注記
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1997年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1996年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
キーワード薬物代謝酵素 / 遺伝子多型性 / 遺伝子型 / 表現型 / 個体差 / 人種差 / 毒理遺伝学 / 中毒学 / チトクロームP-450遺伝子 / N-アセチル転移酵素遺伝子 / 遺伝的多型性
研究概要

チトクロームP-450およびアセチルトランスフェラーゼは、薬物の代謝に中心的な働きをする酵素であり、特に中毒学領域で重要視されている。本研究では、これらのジェノタイプを調べ、さらに薬物動態からのフェノタイプとあわせて、中毒レベルの意義付けを検討した。さらに、変異がもたらす薬物代謝に起因する毒性や薬効の発現についても、検討をおこなった。
ヒト末梢血白血球部分をプロテナーゼK/SDS処理し、フェノール/クロロホルム抽出した後、エタノール沈殿によってDNAを回収し、PCR-RFLP法によって塩基配列を解析した。すなわち、NAT2遺伝子の多型検索において、プライマーは、5'-TGACGGCAGGAATTACATTGTC-3'と5'-ACACAAGGGTTTATTTTGTTCC-3'を作成し、PCRは95℃1.5分、55℃2分、73℃1.5分を35サイクルとした。PCR-RFLP法はBamHI、TaqIまたはKpnIで消化後、10%ポリアクリルアミドゲルで泳動し、銀染色を行った。
その結果、NAT2遺伝子の対立遺伝子間に存在する一塩基置換が、制限酵素による認識を不可能にしていることを利用して、NAT2の遺伝子型の判定が可能であった。すなわち、一塩基置換部位を含む領域を増幅し、PCR産物がBamHI、TaqIまたはKpnIにより切断されない場合がそれぞれallele2、3および4で、3種の制限酵素により切断されるものがallelelであり、検出頻度の最も高い1/1型の他に、1/2型、1/3型、1/4型、3/4型が観察された。更にこれらについては、カフェインをプローブとしてHPLCにより、カフェイン代謝物のAFMU(5-アセチルアミノ-6-ホルミルアミノ-3-メチルウラシル)と1X(1-メチルキサンチン)のモル比から酵素活性を調べた。その結果1/1型に比べて著しい活性の低下が認められ、遺伝子型と表現型の結果は一致していた。
以上のことから、薬物代謝酵素の遺伝子多型性の研究は、薬物濃度の測定に加えて、中毒学的診断に今後きわめて有用になると考えられる。

報告書

(3件)
  • 1997 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1996 実績報告書
  • 研究成果

    (6件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (6件)

  • [文献書誌] Mitsuko Yamada: "Ethnic Difference in Drug Metabolism" Proceedings of the International Meeting of the International Association of Forensic Toxicologists. 35(in press). (1998)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 山田 光子: "DNA多型(分担)" (DNA多型学会)東洋書店, 138-140 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Mitsuko Yamada et al: "Ethnic Difference in Drug Metabolism" Proceedings of the International Meeting of the International Association of Forensic Toxicologists. 35 (in press). (1998)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Mitsuko Yamada et al: DNA Polymorphism, Tokyo, Toyoshoten. Population genetic comparision of DNA polymorphism in drug metabolizing enzymes, 138-140 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Mitsuko Yamada: "Ethnic Difference in Drug Metabolism" Proceedings of the International Meeting of the International Association of Forensic Toxicologists. 35(in press). (1998)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 山田 光子: "DNA多型(分担)" (DNA多型学会)東洋書店, 138-140 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書

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公開日: 1996-04-01   更新日: 2016-04-21  

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