| 研究概要 |
[平成8-9年度研究成果]
目的:新しい神経栄養因子プライオトロピン(Pleiotrophin;PTN)は新生児ラット脳では髄鞘形成期と一致して発現するが、オリゴデンドロサイト(oligodendrocytes;OL)に対する細胞生物学的活性は明らかではない。本研究ではPTNの培養ラットOLに対する増殖・分化誘導能の解析を目的とする。
方法:新生Wisterラット全脳(P1)から混合グリア細胞を得て、poly-L-lysineコート直径9mm円形カバーグラス上に2×10^4cells/40μlの条件で、各種神経栄養因子(PTN,IGF-I,bFGF,PDGF-AA at50ng/ml each,PTN+IGF-I,PTN+bFGF,PTN+PDGF,bFGF+PDGF)添加完全無血清培地[DMEM plus 10μg/ml transferrin,300pM triiodothyrohine,30nM sodium selenate,50nM hydrocortisone,1μg/ml heparin,10μM bromodeoxyuridine(BrdU)without insulin]で分散播種し72時間培養後、OL前駆細胞・幼若OL・成熟OLマーカー(A2B5,O4,O1)抗体と抗BrdU抗体で免疫二重染色を行った。
結果・結論:コントロールに比較しA2B5^+BrdU^+OL前駆細胞数はbFGF,PDGF,bFGF+PDGF投与で約5倍増加したが、PTN,IGF-I投与では変化なく、O4^+BrdU^-幼若OL数はPTN,IGF-I,PTN+IGF-I投与で約3倍増加したが、bFGF,PDGF投与では変化なかった。O1^+BrdU^-成熟OLは極めて少数でその数はIGF-I,bFGF+PDGFで約3倍増加したが、PTN,bFGF,PDGF単独投与では変化なかった。以上よりPTNはIGF-I同様、OL前駆細胞から幼若OLを分化誘導する因子であることが判明した(投稿準備中)。また一連の実験過程で、神経系細胞におけるプリオン蛋白質(prion protein;PrP)発現およびPrP高次構造変換における熱ショック蛋白質(heat shock proteins;HSP)の役割に関し、新知見を得たので報告した。すなわちヒト神経系細胞はニューロトロフィン・サイトカイン受容体遺伝子を構成的に発現し、PrP遺伝子発現が細胞特異的にサイトカインによって制御されていること、PrP遺伝子欠損細胞においてもHSP25,HSP60,HSC70,HSP72,HSP105のheat-inducible and constitutive expressionは保持されることを見い出した。
|
