抗酸化酵素の細胞内局在および分泌機構の解明と成長発達、小児疾患に伴う変動

• 研究課題/領域番号: 08670866
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 小児科学
• 研究機関: 山梨医科大学
• 研究代表者: 朝山 光太郎 山梨医科大学, 医学部, 講師 (70129310)
• 研究分担者: 小寺 浩司 山梨医科大学, 医学部, 医員
• 研究期間 (年度): 1996 – 1997
• 研究課題ステータス: 完了 (1997年度)
• 配分額: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円); 1997年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円); 1996年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
• キーワード: フリーラジカル / 小児 / 成長発達 / 抗酸化酵素 / 免疫組織化学染色 / セレン / 発現誘導 / 過酸化脂質 / 免疫組織化学 / 仏ノアッセイ / 蛋白発現

研究概要

(1)細胞内抗酸化酵素の成長発達に伴う組織内濃度の推移を免疫蛍光染色画像解析法で定量化し,CuZnSOD,MnSOD,細胞内GPXのいずれもバランスした増加が胎生日齢が進むにつれて認められ,特に抗酸化酵素の防御機構が重要な上皮性組織において定量的な成績が得られた.(2)血漿GPXのロケット免疫電気泳動法を開発し,酵素蛋白の比活性の測定を可能性にした.(3)免疫酵素電顕法(免疫金粒子ラベル法)による細胞内GPXの細胞内局在については,ラット肺マクロファージとII型肺胞細胞において高濃度なGPXの局在を明らかにし,ミトコンドリア,核,細胞質基質および他の部位における分布が肝細胞と同様であることを示した.トランスロケーションシグナルを検索することの重要性が再認識された.(4)細胞内GPXの培養細胞における一過性に発現では正常の約3倍のコピー数のGPXを発現させ,細胞内分布を明らかにした.(5)ヒトガン細胞由来の培養細胞におけるラットGPX恒久的過剰発現では正常の約30倍のコピー数のGPXを発現させ,一過性過剰発現モデルよりもさらに明らかな細胞内分布の差を得ることができた.(6)セレン欠乏ラット腎組織中の細胞内GPXと血漿GPXの発現が低下する機構についての研究では,血漿GPXが腎近位尿細管で合成され,ほぼ完全に血中に分泌されることが分かった.セレン欠乏においては翻訳前,翻訳時および翻訳後の各段階でどちらの酵素においても発現の抑制を受けることが明らかになった.(7)家族性筋萎縮性側索硬化症(FALS)における神経細胞封入対におけるCuZnSODの局在についての研究では,多施設との共同研究で,変異SODを有するFALS患者の神経組織の特異的封入体において,SOD免疫活性が増加しておりgain-of function説を支持する所見と思われた.

研究成果

• [文献書誌] Asayama K.: "Imnunohistochemical localization and quantitive analysis of cellular glutathione peroxidase in foetal and neonatal rat tissues;fluorescence microscopy image analysis." Histochem J.28. 63-71 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Asayama K.: "Immunolocalization of cellular glutathione peroxidase in adult rat lungs and quantitative analysis after post-embedding immunogold labeling." Histochem Cell Biol.105. 383-389 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Asayama K,: "Immunohistochemical study on superexide dismutoses in spinal cords from autopside patients with amyotrophic lateral sclerosis." Dev Neurosci. 18. 492-4 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Asayama K.: "Immunohistochemical localization and quantitative analysis of superoxide dismutases in fetal and neonatal rat tissues:Fluorescence microscopy image analysis." Acta Histochem Cytochem. 29(4). 289-297 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Asayama K.: "Increased plasma cholesteryl cster transfer activity in obese children" Atherosclerosis. 129. 53-58 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Asayama K.: "New age-adjusted measure of body fat distribution in children and adolescents:standardization of waist hip ratio using multivariate analysis." Int J.Obes.21. 594-599 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Asayama K,Hayashibe H,Mishiku Y,Honda M,Ito H,Nakazawa S: "Increased activity of plasma cholesteryl ester transfer protein in chidren with end-stage renal disease receiving contnuous ambulatory peritoneal dialysis." Nephron. 72. 231-236 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asayama K,Dobashi K,Kawada Y,Nakane T,Kawaoi A,Nakazawa S: "Immunohistochemical localization and quantitative analysis of cellular glutathione peroxidase in foetal and neonatal rat tissues : fluorescence microscopy image analysis." Histochem. J28. 63-71 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shibata N,Hirano A,Kobayashi M,Siddique T,Deng HX,Hung WY,Kato T,Asayama K: "Intense spueroxide dismutase-1 immunoreactivity in intracytoplasmic hyaline inclusions of familial amyotrophic lateral sclerosis with posterior column involvement." J.neuropathol Exp Neurol. 55 (4). 481-490 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asayama K,Yokota S,Dobashi K,Kawada Y,Nakane T,Kawaoi A,Nakazawa S: "Immunolocalization of cellular glutathione perosidase in adult rat lungs and quantitative analysis after post-embedding immunogold labeling." Histochem Cell Biol. 105. 383-389 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shibata N,Asayama K,Hirano A,Kobayashi M: "Immunohistochemical study on superoxide dismutases in spinal cords from autopsied patients with amyotrophic lateral sclerosis." Dev Neurosci. 18. 492-498 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kawada Y,Asayama K,Dobashi K,Nakane T,Hayashibe H,Kawaoi A,Nakazawa S: "Immunohistochemical localization and quantitative analysis of superoxide dismutases in fetal and neonatal rat tissues : Fluorecence microscopy image analysis" Acta Histochem Cytochem. 29 (4). 289-297 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hayashibe H,Asayama K,Nakane T,Uchida N,Kawada Y,Nakazawa S: "Increased plasma cholesteryl ester transfer activity in obese children" Atherosclerosis. 129. 53-58 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nishiyama K,Murayama S,Nishimura Y,Asayama K,Kanazawa I: "Superoxide dismutase-like immunoreactivity is present in spheroids of Hallervorden Spatz disease." Acta Neurophathol.93. 19-23 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asayama K,Hayashi K,Kawada Y,Nakane T,Uchida N,Hayashibe H,Kawasaki K,Nakazawa S: "New age-adjusted measure of body fat distribution in children and adolescents : standardization of waist hip ratio using multivariate analysis." Int J Obes. 21. 594-599 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kato S,Hayashi H,Nakashima K,Nanba E,Kato M,Hirano A,Nakano I,Asayama K,Ohama E: "Pathological characterization of astrocytic hyaline inclusions in familial amyotrophic lateral sclerosis." Am J Pathol. 151. 611-620 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asayama K,nakane T,Uchida N,Hayashibe H,Nakazawa S,Kato K,Qin P,Gross AJ: "Age-adjusted anthropometric index of overweight optimized for ages ranging from 6 to 14 years." Clinical Pediatric Endocrinology. 6 (1). 39-45 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Noak H,Lindenau J,Rothe F,Asayama K,Wolf G: "Differential expression of superoxide dismutase isoforms in neuronal and glial compartments in the course of excitotoxically mediated" Glia. (in press). (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Singh AK,Dobashi K,Gupta MP,Asayama K,Singh I,Orak JK: "Manganese superoxide dismutase in rat liver peroxisomes : Biochemical and immunochemical evidence." Biochim Biophys Acta. (in press). (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nakane T,Asayama K,Kodera K,Hayashibe H,Uchida N,Nakazawa S: "Effect of selenium deficiency on cellular and extracellular glutathione peroxidases : immunochemical detection and mRNA analysis in rat kidney and serum." Free Radic Biol Med. (in press). (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asayama K,Sandhir R,Sheikh FF,Hayashibe H,Nakane T,Singh I: "Activation of fatty acid oxidation and enhanced expression of peroxisome proliferator-activated receptor-a in diabeticrat liver." Mol Cell Biochem. (under consideration).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asayama K.: "Immunohistochemical localization and quantitive analysis of cellular glutathion peroxidase in foetal and neonatal rat tissues;fluorescence microscopy image analysis." Histochem J.28. 63-71 (1996)
• [文献書誌] Asayama K.: "Immunolocalization of cellular glutathione peroxidase in adult rat lungs and quantitative analysis after post-embedding immunogold labeling." Histochem Cell Biol. 105. 383-389 (1996)
• [文献書誌] Asayama K.: "Immunohistochemical study on superoxide dismutases in spinal cords from autopside patients with amyotrophic lateral sclerosis." Dev.Neurosci. 18. 492-498 (1996)
• [文献書誌] Asayama K.: "Immunohistochemical localization and quantitative analysis of superoxide dismutases in fetal and neonatal rat tissues:Fluorescence microscopy image analysis" Acta Histochem Cytochem. 29(4). 289-297 (1996)
• [文献書誌] Asayama K.: "Increased plasma cholesteryl ester transfer activity in obese chidren." Atherosclerosis. 129. 53-58 (1997)
• [文献書誌] Asayama K.: "New age-adjusted measure of body fat distribution in children and adolescents:Standardization of waist hip ratio using multivariate analysis." Int J.Obes.21. 594-599 (1997)
• [文献書誌] 朝山,光太郎: "Increased activity of plasma cholesteryl ester transfer protein in children with end-stage renal disease receiving continuous ambulatory peritonealdialysis." Nephron. 72. 231-236 (1996)
• [文献書誌] 朝山,光太郎: "Immunohistochemical localization and quantitative analysis of cellular glutathione peroxidase in foetal and neonatal rat tissues : fluorescence microscopy image analysis." Histochemical Journal. 28. 63-71 (1996)
• [文献書誌] 柴田,亮行: "Intense superoxide dismutase-1 immunoreactivity in intracytoplasmic hyaline inclusions of familial amyotrophic lateral sclerosis with posterior column involvement." Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 55(4). 481-490 (1996)
• [文献書誌] 朝山,光太郎: "Immunolocalization of cellular glutathione peroxidase in adult rat lungs and quantitative analysis after post-embedding immunogold labeling." Histochemistry and Cell Biology. 105. 383-389 (1996)
• [文献書誌] 柴田 亮行: "Immunohistochemical study on superoxide dismutases in spinal cords from autopsied patients with amyotrophic lateral sclerosis." Developmental Neuroscience. 18. 492-498 (1996)
• [文献書誌] 朝山 光太郎: "活性酸素と病態,糖尿病" 臨床検査. 40(2). 176-180 (1996)
• [文献書誌] 川田 康介: "Immunohistochemical localization and quantitative analysis of superoxide dismutases in fetal and neonatal rat tissues : Fluorescence microscopyimage analysis." Acta Histochemica et Cytochemica. 29(4). 289-297 (1997)
• [文献書誌] 西山 和利: "Superoxide dismutase-like immunoreactivity is present in spheroids of Hallervorden Spatz disease." Acta Neuropathologica. (印刷中). (1997)