可溶性G-CSFレセプターの解明

• 研究課題/領域番号: 08671239
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 血液内科学
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 岡村 精一 九州大学, 医学部, 講師 (20136435)
• 研究分担者: 横山 俊宏 九州大学, 医学部, 医員 ; 浅野 嘉延 九州大学, 医学部, 助手 (60271110) ; 中島 衡 九州大学, 医学部, 助手 (70188960)
• 研究期間 (年度): 1996 – 1997
• 研究課題ステータス: 完了 (1997年度)
• 配分額: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円); 1997年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円); 1996年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
• キーワード: 可溶性G-CSFレセプター / G-CSF / cDNA / 先天性好中球減少症 / 急性骨髄性白血病 / 遺伝子発現 / スプライシング / セルソーター

研究概要

可溶性G-CSFレセプターの検出:ヒト血清をビオチン標識したG-CSFと孵置した後にnative PAGEで泳動し,ニトロセルロース膜に移したものとperoxidase(PO)標識streptavidinと反応させPOを発色させた.すると,95kDと105kDにバンドが検出された.G-CSFの分子量は約20kDを減じると,75kDと85kDのG-CSFと結合する血清蛋白の存在が考えられた.さらに,G-CSFレセプターの細胞外部分と細胞内部分のペプチドを合成し,それを各々抗原として家兎で抗体作製した.これらの抗体を用いてのウエスタンブロットでもほぼ同じ大きさにG-CSFレセプターのバンドを認めた.
可溶性G-CSFレセプターの構造:ヒト好中球系細胞の成熟段階における,可溶性G-CSFレセプターの発現状況をRT-PCR法で検索した.可溶性G-CSFレセプターは膜貫通部を欠いたII型のcDNAがコードしていると考えられ,膜貫通部を挟むプライマーを用いてRT-PCRを行うと,これは野生型(I型)に比べて,短いバンドとして検出される.ヒト骨髄細胞をセルソーターで成熟段階にしたがい,分離してG-CSFレセプターの膜貫通部を挟むプライマーを用いてRT-PCRを行うと,2つのバンドが検出され,可溶性G-CSFレセプター由来の短いバンドは成熟段階が進行するに従いその割合が増加していた。
可溶性G-CSFレセプター作用:可溶化したマウスG-CSFレセプターをヒト骨髄細胞に試験管内で作用させた.これはG-CSFによる顆粒球コロニー形成刺激作用を抑制した.さらに,こらは一部のヒト骨髄性白血病細胞の増殖を抑制した.一方,先天性好中球減少疾症患者から膜貫通部を含む第15エクソン全体が欠失しているクローンを得た.この変化はヒト骨髄性白血病細胞株の一部でも検出された.この異常な可溶性G-CSFレセプターはより強力に正常顆粒球造血を抑制している可能性があり,蛋白を発現させて作用を研究中である.

研究成果

• [文献書誌] Takenaka K.: "Generation of human natural killer cells from peripheral blood CD34+cells mobilized by granulocyte colony-stimulating factor." British Journal of Haematology. 92(4). 788-794 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kuroiwa M.: "Effects of granulocyte colony-stimulating factor on the hemostatic system in healthy volunteers." International Journal of Hematology. 63(4). 311-316 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kubot A.: "Immunophenotyping of peripheral blood mononuclear cells collected by cytotoxic and cytotoxic/G-CSF mobilization." Clinical and Laboratory Haematology. 18. 181-185 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Matsunaga .T: "Rotenone,a mitochondrial NADH dehydrogenase inhibitor,induces cell surface expression of CD13 and CD38 and apoptosis in HL-60 cells." Leukemia Lymphoma. 20. 487-494 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Tanaka, Y.: "Effect of IL-10 on collagen-induced arthritis in mice." Inflammation Research. 45. 283-288 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Chen, F.: "Reversible primary hypothyroidism with blocking or stimulating type TSH binding inhibitor immunoglobulin following recombinant interferon-a therapy in patients with pre-existing thyroid disorders." Clinical Endocrinology. 45. 207-214 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Tsutsui, S.: "Prognostic significance of immunological parameters in patients with esophageal cancer. In vitro study of deoxyspergualin on function of lymphocytes and bone marrow cells from healthy volunteers." Hepato-Gastroenteology. 43. 501-509 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Asano Y.: "Effect of the chimeric soluble granulocyte colony-stimulating factor receptor on the proliferation of leukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." Cancer Research. 57(16). 3395-3397 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Niiro H.: "Regulation by interleukin-10 and interleukin-4 of cyclooxygenase-2 expression inhuman neutrophils" Blood. 89. 1621-1628 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Asano Y.: "Effect of(-)-epigallocatechin gallate on leukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." Life Sciences. 60(2). 135-142 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Tanaka Y.: "Detection of polymorphisms witihn the human IL-10 receptor DNA gene sequence by RT-PCR RFLP." Immunogenetics. 46. 439-441 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Asano Y.: "Interleukin-10 inhibits the autocrine growth of leukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." International Journal of Hematology. 66. 445-450 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Asano Y.: "Analysis of G-CSF receptor in various hematological disorders.Approaches to Diseases (Niho Y.ed)" Kyushu University Press., Fukuoka, 12 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 岡村 精一: "G-CSFレセプターのシグナル伝達機構とその異常,Annual Review 血液97" 中外医学社,東京, 16 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 岡村 精一: "G-CSFレセプター異常と好中球減少症,Annual Review 血液98" 中外医学社,東京, 7 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 岡村 精一: "悪性リンパ腫の化学療法-適応と実際-,白血病リンパ腫骨髄腫今日の診断と治療" 中外医学社,東京, 23 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kubota A.: "Immunophenotyping of peripheral blood mononuclear cells collected cytotoxic and cytotoxic/G-CSF mobilization." Clinical and Laboratory Haematology. 18. 181-185 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kuroiwa M.: "Effects of granulocyte colony-stimulating factor on the hemostatic system in healthy volunteers." International Journal of Hematology. 63. 311-316 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Takenaka K.: "Generation of human natural killer cells from peripheral blood CD34+cells mobilized by granulocyte colony-stimulating factor." British Journal of Haematology. 92. 788-794 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Tsutsui S.: "Prognostic significance of immunological parameters in patients with esophageal cancer. In vitro study of deoxyspergualin on function of lymphocytes and bone marrow cells from healthy volunteers." Hepato-Gastroenteology. 43. 501-509 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Matsunaga T.: "Rotenone, a mitochondrial NADH dehydrogenase inhibitor, induces cell surface expression of CD 13 and CD38 and apotosis in HL-60 cells." Leukemia and Lymphoma. 20. 487-494 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Chen F.: "Reversible Primary hypothyroidism with blocking or stimulating type TSH binding inhibitor immunoglobulin following recombinant interferon-a theraphy in patients with pre-existing thyroid disorders." Clinical Endoctinology. 45. 207-214 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asano Y.: "Effect the chimeric soluble granulocyte colony-stimulating factor receptor on the proliferation of leukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." Cancer Research. 57(16). 3395-7 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Niiro H.: "Regulation by interleukin-10 and interleukin-4 of cycloxygenase-2 expression inhuman neutrophils." Blood. 89. 1621-1628 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asano Y.: "Effect of (-)-epigallocatechin gallate on leukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." Life Sciences. 60(2). 135-42 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asano Y.: "Interleukin-10 inhibits the autocrine growth of leukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." International Journal of Hematology. 66. 445-450 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Komaki G.: "Alterations in lymphocytes subsets and pituitary-adrenal gland-related hormones during fasting." American Journal of Clinical Nutrition. 66. 147-152 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Tanaka Y.: "Detection of polymorphisms within the human IL-10 receptor DNA gene sequence by RT-PCR RFLP." Immunogenetics. 46. 439-441 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shibata S.: "Analysis of the granulocyte colony-stimulating factor receptor gene structure using PCR-SSCP in the myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome." Eur J Haematol. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asano Y.: Analysis of G-CSF receptor in various hematological disorders.Niho Y.ed.An Approach to Diseases. Fukuoka : Kyushu University Press., 12 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asano Y.: "Effect of the chimeric soluble granulocyte colony-stimulating factor receptor on the proliferation of leukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." Cancer Research. 57(16). 3395-3397 (1997)
• [文献書誌] Niiro H.: "Regulation by interleukin-10 and interleukin-4 of cyclooxygenase-2 expression inhuman neutrophils" Blood. 89. 1621-1628 (1997)
• [文献書誌] Asano Y.: "Effect of(-)-epigallocatechin gallate on leukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." Life Sciences. 60(2). 135-142 (1997)
• [文献書誌] Asano Y.: "Interleukin-10 inhibits the autocrine growth ofleukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." International Journal of Hematology. 66. 445-450 (1997)
• [文献書誌] Tanaka Y.: "Detection of polymorphisms within the human IL-10 receptor DNA gene sequence by RT-PCR RFLP" Immunogenetics. 46. 439-441 (1997)
• [文献書誌] Shibata S.: "Analysis of the granulocyte colony-stimulating factor receptor gene structure using PCR-SSCP in the myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome" European Journal of Haematology. (印刷中).
• [文献書誌] Komaki G.: "Alterations in lymphocytes subsets and pituitary-adrenal gland-related hormones during fasting" American Journal of Clinical Nutrition. 66. 147-152
• [文献書誌] 岡村精一: "G-CSFレセプターを介する増殖・分化のシグナル伝達" 医学のあゆみ. 180. 826-831 (1997)
• [文献書誌] 岡村精一: "G-CSFレセプターと好中球減少症" 日常診療と血液. 7. 1441-1420 (1997)
• [文献書誌] 岡村精一: "Hodgkin病に対する治療の進め方" 内科. 80. 461-465 (1997)
• [文献書誌] 広田雄一: "悪性リンパ種の治療" 血液・腫瘍科. 35. 89-102 (1997)
• [文献書誌] 下田和哉: "G-CSFレセプターを介する細胞内情報伝達機構" 臨床血液. 38. 193-195 (1997)
• [文献書誌] 下田和哉: "G-CSFレセプターを介するシグナル伝達機構" 臨床免疫. 30. 52-58 (1998)
• [文献書誌] 岡村精一: "G-CSFレセプターのシグナル伝達機構とその異常.Annual Review 血液97" 中外医学社,東京, 16 (1997)
• [文献書誌] 岡村精一: "G-CSFレセプター異常と好中球減少症.Annual Review 血液98" 中外医学社,東京, 7 (1998)
• [文献書誌] 岡村精一: "悪性リンパ腫の化学療法-適応と実際-.白血病リンパ腫骨髄今日の診断と治療" 中外医学社,東京, 23 (1997)
• [文献書誌] 岡村精一: "G-CSF受容体異常.キーワード1997-'98血液" 先端医学社(印刷中),
• [文献書誌] Takenaka K.: "Generation of human natural killer cells from peripheral blood CD34+cells mobilized by granulocyte colony-stimulating factor." British Journal of Haematology. 94(4). 788-794 (1996)
• [文献書誌] Kuroiwa M.: "Effects of granulocyte colony-stimulating factor on the hemostatic system in healthy volunteers." International Journal of Hematology. 63(4). 311-316 (1996)
• [文献書誌] Asano Y.: "Effect of (-)-epigallocatechin gallate on leukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." Life Sciences. 60(2). 135-142 (1997)
• [文献書誌] Tsutsui.S.: "Prognostic significance of immunological parameters in gatients with esophageal cancer. In vitro study of deoxyspergualin on function of lymphocytes and bone marrow cells from healthy volunteers." Hepato-Gastroenteology. 43. 501-509 (1996)
• [文献書誌] Matsunaga.T.: "Rotenone,a mitochondrial NADH dehydrogenase inhibitor,induces cell surface expression of CD 13 and CD38 and apoptosis in HL-60 cells." Leukemia Lymphoma. 20. 487-494 (1996)
• [文献書誌] Chen,F.: "Reversible primary hypothyroidism with blocking or stimulating type TSH binding inhibitor immunoglobulin following recombinant interferon-a therapy in patients with pre-existing thyroid disordes." Clinical Endocrinology. 45. 207-214 (1996)
• [文献書誌] Tanaka,Y.: "Effect of IL-10 on collagen-induced arthritis in mice." Inflammation Research. 45. 283-288 (1996)
• [文献書誌] 岡村精一: "G-CSFレセプターを介する増殖・分化のシグナル伝達" 医学のあゆみ. (印刷中).
• [文献書誌] 岡村精一: "造血幹細胞からの顆粒球系細胞の分化" Mebio. (印刷中).
• [文献書誌] Asono Y.: "Analysis of G-CSF receptor in various hematological disorders. Approaches to Diseases (Niho Y.ed)" Kyushu University Press,Fukuka, 12 (1996)
• [文献書誌] 岡村精一: "G-CSFレセプターのシグナル伝達機構とその異常.Annal Rwview 血液97" 中外医学社,東京, 16 (1997)
• [文献書誌] 岡村精一: "G-CSF受容体異常.キーワード1997-'98血液" 先端医学社(印刷中),