| 研究課題/領域番号 |
08671251
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
血液内科学
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
今川 重彦 自治医科大学, 医学部, 講師 (60231164)
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| 研究期間 (年度) |
1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1996年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | エリスロポエチン遺伝子 / GATA転写因子 / プロモーター |
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| 研究概要 |
我々は、従来エリスロポエチン(Epo)遺伝子の発現調節機序解析を行っている。最近では、cytochrome b-typeのへム蛋白がEpoの酸素センサーであると報告されたが、とするとH_2O_2がこの酸素センサーと転写因子を連絡するintracellular messangerである可能性が考えられる。そこでH_2O_2をHep3B細胞へ添加すると用量依存性にEpo蛋白・mRNA量が減少することを認めた。またH_2O_2によりGATA転写因子の発現は用量依存性に増加することを認めた。そこでヒトEpo遺伝子のプロモーター部位及びエンハンサー部位をluciferase遺伝子と結合させたPwtをHep3B細胞へ導入し、低酸素下で培養後luciferase活性を検討した結果、H_2O_2投与によりEpoのプロモーター活性は低下するがこれはcatalaseの前処理により解除されるためEpoプロモーター活性の低下はH_2O_2に特異的と考えられた。さらにPwtのGATA結合部位のmutant(Pm7)を用い同様の検討を行ったところ、Epoのプロモーター活性の低下は認められなかった。以上よりH_2O_2の効果はGATA転写因子に特異的でありEpoのプロモーター活性を低下させるものと考えられた。さらにmouse GATA-2プロモーター-145〜+171をluciferaseに結合させたmGB_1をHep3B細胞へ導入し、低酸素下でのluciferase活性を検討した結果H_2O_2によりmGATA-2プロモーター活性が亢進し、またcatalase投与によりこの活性亢進は解除されることを確認した。つまりH_2O_2によりGATAプロモーター活性が亢進し、GATA転写因子の発現レベルが亢進するためにEpo遺伝子のプロモーター活性が低下し、Epo遺伝子の発現が低下する機序が考えられた。現在、他の転写因子(HNF4,EAR3/COUP-TF1)に対するH_2O_2のEpo遺伝子発現に対する効果を検討中である。
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