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消化管における水チャネルの発現と機能に関する基礎的研究

研究課題

研究課題/領域番号 08671342
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 外科学一般
研究機関新潟大学

研究代表者

佐藤 信昭  新潟大学, 医学部・附属病院, 講師 (90215822)

研究分担者 山本 格  新潟大学, 医学部, 助教授 (30092737)
林 光弘  新潟大学, 医学部・附属病院, 医員
親松 学  新潟大学, 医学部附属病院, 医員
小山 諭  新潟大学, 医学部附属病院, 医員
研究期間 (年度) 1996 – 1997
研究課題ステータス 完了 (1997年度)
配分額 *注記
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1997年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1996年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
キーワード水チャネル / アクアポリン / RN cise protection assay / 消化管 / 脾 / 肝 / RNase protection assay / 膵 / RNase Protection Assay
研究概要

1.ラット消化管からの水チャネルの発現
ラット胃、小腸、大腸mRNAより、水チャネルdegenerate primerを用いRT-PCR法によりhomology cloningを行い、3種類の水チャネルclone(AQP1,3,4)が得られた。各臓器の局在をRNase protection assay法とIn situ Hybridization法により検討した。AQP1、AQP3は食道から遠位結腸まで広範に分布していたが、AQP4は胃下部および小腸中部から回腸、AQP8は空腸と結腸に限局して存在した。
2.ラット脾、肝からの新しい水チャネルのクローニング
ラット脾mRNAより新しい水チャネルcloneを得た。RNase protection assay法により肝にも存在することが判明、ラット肝Libraryより会長のcDNAをクローニングし、シークエンスを決定し、GenbankにAQP8として登録した。アフリカツメガエル卵細胞を用いた発現系により水チャネルとしての機能を確認した。さらに、Nothern blot、RNase protection assay法によりラット肝、脾のほか大腸、唾液腺に存在することを明らかにした。
3.ラットAQP8に対する抗体作製
ラットAQP8のC末端(10ペプチド)に対する抗体作製は、titerが低いため、Expression vectorにAQP8の一部をcodeするcDNAを組み込み、recombinant peptideを作り精製した。これを用い、ウサギで抗体を作製中である。
4.ラット小腸大量切除モデルにおける水チャネルmRNAの発現
ラット小腸大量切除モデルを作製し、コントロール(空腸の切離・再吻合)群、正常ラットと消化管各部位での4種類の水チャネル(AQP1,3,4,8)のmRNAの発現量の変化についてRNase protection assay法を用いて比較した。小腸大量切除術後では空腸のAQP8の発現が一時的に増加する傾向が認められた。

報告書

(3件)
  • 1997 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1996 実績報告書
  • 研究成果

    (3件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (3件)

  • [文献書誌] Koyama Y, et al.: "Molecular Cloning of a New Aquaporin from Rat Pancreas and Liver" Jounal of Biological Chemistry. 272. 30329-30333 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Koyama Y,amamoto T,Kondo D,Funaki H,Yaoita E,Kawasaki K,Sato N,Hatakeyama K,and Kihara I: "Molecular Cloning of a New Aqua porin from Rat Pancreas and Liver." Journal of Biological Chemistry. 272 (48). 30329-30333 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1997 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Koyama Y, et al.: "Molecular Cloning of a New Aquaporin from RatPancreas and Liver" Journal of Biological Chemistry. 272. 30329-30333 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書

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公開日: 1996-04-01   更新日: 2016-04-21  

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