好中球のTransmigrationにおける血管内皮細胞機能に関する研究

• 研究課題/領域番号: 08671507
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 胸部外科学
• 研究機関: 秋田大学
• 研究代表者: 南谷 佳弘 秋田大学, 医学部, 講師 (30239321)
• 研究分担者: 北村 道彦 秋田大学, 医学部, 助教授 (10153131) ; 榎本 克彦 秋田大学, 医学部, 教授 (20151988) ; 泉 啓一 秋田大学, 医学部, 講師 (60176237)
• 研究期間 (年度): 1996 – 1997
• 研究課題ステータス: 完了 (1997年度)
• 配分額: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円); 1997年度: 200千円 (直接経費: 200千円); 1996年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
• キーワード: 好中球 / 血管内皮細胞 / 血管外遊走 / ミオシン軽鎮 / ミオシン軽鎮キナーゼ / ミオシン軽鎖中ナーゼ / ミオシン軽鎖 / ミオシン軽鎖キナーゼ / アクチン

研究概要

培養人臍帯静脈血管内皮細胞(以下HIVEC)と人分離好中球を用いて,好中球の血管外遊走における血管内皮細胞機能を検討した.HIVECを人羊膜上に培養し,この膜で上下に隔てたchamberを作製した.好中球を上室に,走下因子(leukotriene B4)を下室に添加して羊膜上のHUVEC下に遊走する好中球の数を組織学的に数えて好中球の血管外遊走を評価した.この系でHUVECをあらかじめchlcitor,calmuline阻害剤であるtrifluperdine,myosin light chain kinase(MLCK)の阻害剤であるML-9,ML-7で前処置すると好中球のHUVEC下への遊走が濃度依存性に抑制された.また好中球のHUVEC下遊走に伴いmyosinのdistributionの変化とactinのpolymerzition(G-actin->F-actin)を認めた(抗myosin抗体染色,phalloidine染色).そしてHUVECを放射性リンでラベルして行った免疫沈降法により好中球のHUVEC下遊走に伴いmyosin light chainがリン酸化をされることが明らかとなった.以上のmyosinのdistributionの変化とactinのpolymerzition,myosin light chainのリン酸化はHUVECをあらかじめcalcium chelator,trifuoperadine,ML-9,ML-7で前処置する抑制された.以上の結果より血管内皮細胞のMLCKにより好中球の血管外遊走がコントロールされているという結果を得た.