| 研究課題/領域番号 |
08671589
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
脳神経外科学
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| 研究機関 | 佐賀医科大学 |
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研究代表者 |
阿部 雅光 (1997) 佐賀医科大学, 医学部, 助教授 (20136427)
萩原 直司 (1996) 佐賀医科大学, 医学部, 助手 (90281203)
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| 研究分担者 |
木原 俊一 佐賀医科大学, 医学部, 助手 (30253610)
田渕 和雄 佐賀医科大学, 医学部, 教授 (50116480)
阿部 雅光 佐賀医科大学, 医学部, 助教授 (20136427)
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| 研究期間 (年度) |
1996 – 1997
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| 研究課題ステータス |
完了 (1997年度)
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| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1997年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1996年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | Fas ligand / Fas / apoptosis / brain tumor / glioma / 脳腫瘍 / アポトーシス / TUNEL / OK-432 |
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| 研究概要 |
IL-2やOK-432にて賦活化した末梢血単核球細胞よりmRNAを抽出し、PT-PCR法を用いて全長Fasリガンド(h-FasL)を同定しサブクローニング後大腸菌にトランスフォメーションし、得られたクローンよりFasL cDNAを調製した。これをpBlueBacHisトランスファーベクターにクローニングを行い線状野生型バキュロウイルスDNAと昆虫細胞Sf9に同時感染を行い組み替えバキュロウイルスを構築した。組換えバキュロウイルスをSf9細胞に感染させてrecombinant h-FasL(rh-FasL)を得た。組換え蛋白のヒスチジンタグと親和性を示すニッケルキレートカラムを用いてrh-FasLの精製を行った。Western blottingおよびELISAでFasLの存在を確認した。FasLは免疫組織化学的にSf9の細胞膜に発現していた。
Fasを発現している悪性経膠腫培養細胞T98Gに対してrh-FasLを作用させると濃度および時間依存性にアポトーシスが誘導された。rh-FasLの殺細胞効果は、同細胞株にアポトーシスを誘導できる抗Fas抗体の10倍であった。抗Fas抗体に対して感受性が低い細胞株や抵抗性を示した細胞株でもアポトーシスを誘導できたが、T98G細胞よりも数倍の濃度を要した。
ヒトグリオーマ細胞株5株、および生検グリオーマ組織11例よりlysateを作製し、Western blottingを行ったところ、細胞株では全例に、グリオーマ組織では10例でFasLが認められた。悪性グリオーマ術中生検組織の免疫組織化学的検討では、Fasは大多数の膠芽腫で細胞質に陽性反応が認められた。4症例で増殖した血管内皮、浸潤リンパ球さらには一部の腫瘍細胞で陽性反応が認められた。血管内皮にFasLが強く染色される例では、FasLがCTLの脳腫瘍組織内への進入を防いでいる可能性が考えられた。
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