| 研究課題/領域番号 |
08671969
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
耳鼻咽喉科学
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| 研究機関 | 香川医科大学 |
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研究代表者 |
森 望 香川医科大学, 医学部, 教授 (90124883)
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| 研究分担者 |
星川 広史 香川医科大学, 医学部・附属病院, 助手 (70294767)
古田 浩 香川医科大学, 医学部・附属病院, 講師 (90209180)
曽根 美恵子 香川医科大学, 医学部, 助手 (30253280)
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| 研究期間 (年度) |
1996 – 1997
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| 研究課題ステータス |
完了 (1997年度)
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| 配分額 *注記 |
2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
1997年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1996年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | 内リンパ嚢 / ホルモンレセプター / イオンチャンネル / PCR / 内リンパ襄 |
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| 研究概要 |
分子生物学的なアプローチを用いて内リンパ嚢におけるイオンチャンネル、ホルモンレセプター遺伝子の発現を検討した。SD系もしくはウィスター系の成熟ラットの内リンパ嚢からCs TFA超遠心法にてtotal RNAを精製し、逆転写酵素を用いてcDNAを合成した。次に、ラットアミロライド感受性ナトリウムチャンネル(alphaサブユニット)、バゾプレッシンV1a・V1b・V2レセプター、ANP-Aレセプター、ANP-Bレセプター、アルドステロンレセプターの遺伝子に特異的なプライマーを合成し、これを用いてcDNAのPCR増幅を行った。アガロースゲル上でDNAのバンドを確認し、これをサブクローニング、塩基配列を決定した。PCR増幅にて、発現が確認できたレセプターに関しては、それぞれの遺伝子の塩基配列に相補的なジゴキシゲニン、もしくは35S標識のRNAプローブを合成した。次に、それぞれのプローブについて、ラット内リンパ嚢の凍結切片を用いてin situハイブリダイゼーションを施行した。
PCR増幅では内リンパ嚢からアミロライド感受性ナトリウムチャンネル、アルドステロンレセプター、バゾプレッシンV1aレセプター、ANP-Aレセプターが検出されたが、V1b・V2レセプター、ANP-Bレセプターは検出されなかった。in situハイブリダイゼーションではアルドステロンレセプターのみ検出され、内リンパ嚢の中間部上皮細胞に発現していた。今回の結果からアルドステロンはナトリウムイオン輸送を通して内リンパ液の吸収の調節に関与していることを示唆しているものと考えられる。
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