| 研究課題/領域番号 |
08680761
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
細胞生物学
|
|---|
| 研究機関 | 名古屋大学 |
|---|
研究代表者 |
門松 健治 名古屋大学, 医学部, 助教授 (80204519)
|
|---|
| 研究分担者 |
村松 寿子 名古屋大学, 医学部, 助手 (50182134)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1996
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1996年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
|
|---|
| キーワード | ミッドカイン / ヘパリン / 成長因子 / アクチビン / 形質転換 |
|---|
| 研究概要 |
1.NIH3T3細胞への作用:細胞増殖促進、足場非依存性増殖、ヌードマウスにおける造腫瘍能の3点を満たすことから、MKがMIH3T3細胞を形質転換させる能力を持つことがわかった。但し、これはcDNAを導入した場合におこり、外来性のMK蛋白では誘導されないこと、さらに、cDNA導入に際し、細胞核周辺にMK蛋白の集積がみられることから、NIH3T3細胞の形質転換には細胞に内存性のNKが、分泌型のMKに加えて重要なことが示唆された。また、もう1つの重要な特徴として、形質転換した細胞が基質から自然に遊離する現象がみられた。
2.アクチビンとのクロストーク:アフリカツメガエルの初期発生において、アクチビンは中胚葉を誘導し、さらに2次的に神経を誘導する。アフリカツメガエルMKのRNAを初期発生段階のアフリカツメガエルに注入すると、アクチビンによる中胚葉誘導が阻害される。このことはアニマルキャップの伸展の阻害およびRT-PCRによる中胚葉マーカーの発現の抑制の両者で確かめられた。一方、神経誘導では、頭部と体尾部マーカーで大きな違いがあり、前者は誘導され、後者は中胚葉と同様抑制された。MKとアクチビンは直接結合しないことから、各々の細胞内シグナル伝達機構の間でクロストークがあることが示唆された。
3.マウス13.5日胚脳神経細胞への応用:ビオチンMKのin situ binding assayにより、マウス13.5日胚の中枢神経を含むいくつかの組織が、MKと結合することが示された。そこで、さらに、13.5日胚脳神経細胞の初代培養を用いて、^<32>Pーリン酸ラベルによって、MKに結合する蛋白を解析した。その結果、400〜700ダルトンを中心にSPS-PAGF上で、幅広くスメアを引くリン酸化された糖蛋白がMKに特異的に結合することが判明した。
今年度の成果により、MKの標的細胞として、MIH3T3細胞、アフリカメツガエルの外胚葉、マウス13.5日胚脳神経細胞が明らかになった。今後、MKとアクチビンあるいはTGF-βスーパーファミリーとの相互作用の分子機構解明、細胞内シグナルの動態解析、MKと結合する糖蛋白の解析の3点に力点をおいて、研究を進める。
|
