| 研究概要 |
【目的,方法】摘出ラット肝灌流モデルを用い,low flow hypoxiaによる肝障害について検討した.ラット摘出肝灌流モデルにおいて,low flow hypoxiaモデルを作製し以下の検討を行った.(1)生体蛍光顕微鏡下に2'7'dichloro-fluorescin diacetateを負荷し過酸化水素の産生を検出した.(2)セリウム法にて過酸化水素の発生源を同定した.(3)パラフィン切片を用いTUNEL法にてapoptosisを検出した.(4)類洞内皮細胞を特異的に認識するSE-1抗体,Kupffer細胞を認識する抗ラットマクロファージ抗体とTUNEL法との二重染色によってapoptosis細胞を同定した.(5)allopurinolにより活性酸素の産生を抑制しこれによりapoptosisが抑制されるかを検討した.
【結果】過酸化水素の産生はlow flow hypoxia群ではmidzoneを中心にcontrol群に比し有意に強く認められた.セリウム法では過酸化水素の産生は肝細胞と考えられた.TUNEL法によるapoptosis細胞はmidzoneに存在する非実質細胞であった.SE-1抗体,抗ラットマクロファージ抗体とTUNEL法との二重染色によってapoptosis細胞は類洞内皮細胞と同定した.allopurinolの前投与によって過酸化水素の産生は抑制され,これに伴いapoptosisも抑制された.
【結論】low flow hypoxiaによる肝細胞からの活性酸素の産生がapoptosisシグナルとなり,類洞内皮細胞にapoptosisを生じ,これが虚血肝障害の一因と考えられた.necrosisと細胞内カルシウムイオンとの関係については報告されているが,apotosisにおける細胞内カルシウムイオンの意義については報告がなく,現在検討を行っているところである.
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