| 研究概要 |
PMSG投与による過排卵処理したSprague-Dawley(SD)系雌ラットを用いて、radioreceptor assay、autoradiography、およびNorthern blot解析を行い、卵巣内angiotensin II受容体の排卵過程における生化学的特性を検討した。
(1)radioreceptor assay:PMSG刺激後のラット卵巣より細胞膜分画を抽出し、^<125>I-Salile-Ang IIとAng II analogを用いてradioreceptor assayを行った。IC_<50>は、Salile-Ang II:<10^<-8>M,synthetic Ang II:<10^<-7>M,saralasin:<10^<-9>Mであり、卵巣膜分画には高親和性のAng II受容体が存在した。また、AngII受容体のサブタイプであるAT_1に特異的なCV-11974ではIC_<50>:<10^<-7>M、AT_2に特異的なPD123319ではIC_<50>:<10^<-8>Mであった。
(2)autoradiography:PMSG刺激後のラット卵巣において、^<125>I-Salile-Ang IIを用いたautoradiographyを行った。ラット卵巣では顆粒膜細胞と莢膜細胞に^<125>I-Salile-Ang IIと親和性を有するAng II受容体の局在が認められた。さらにAng II選択的拮抗剤を添加すると、CV-11974では変化がないのに対し、PD123319では^<125>I-Salile-Ang IIの結合が抑制された。
(3)Northern blot解析:PMSG刺激後のラット卵巣の顆粒膜細胞よりmRNAを抽出し、ラットAT_2受容体cDNAをプローブとして、^<32>P dATPを用いたNorthern blot解析を行った。ラット卵巣内には3.5kbのAT_2受容体mRNAの発現が認められた。
以上より、排卵過程における顆粒膜細胞および莢膜細胞にはAng II受容体が局在し、Ang IIに高親和性を示し、この受容体はAT_2受容体であることが明らかとなった。
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