c-mycによる熱ショックタンパク質70(hsp70)遺伝子の発現制御と細胞周期

• 研究課題/領域番号: 08772076
• 研究種目: 奨励研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 生物系薬学
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 平 敬宏 北海道大学, 薬学部, 助手 (70197036)
• 研究期間 (年度): 1996
• 研究課題ステータス: 完了 (1996年度)
• 配分額: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円); 1996年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
• キーワード: c-myc / 転写制御 / エンハンサー / 熱ショックタンパク質 / 細胞周期 / 癌遺伝子

研究概要

1、hsp70遺伝子上のC-MYC複合体認識配列MYC Bの解析
前年度までにhsp70遺伝子プロモーター上のC-MYC複合体認識配列MYC Bはエンハンサーとして機能するすることを報告した。今年度、更にこの配列がhsp70遺伝子のG1期での発現を担っているエンハンサーであることを明らかにした。すなわち、MYC Bに変異を導入したhsp70遺伝子プロモーターはG1期での発現がなくなること、MYC BをS期で発現するPCNA,cyclinA遺伝子プロモーターに連結すると新たにG1期に発現ピークが出現することから明らかとなった。
2、MYC Bに結合するタンパク質因子の同定とcDNAクローニング
MYC B配列は他のエンハンサーであるCAAT配列と一部重複して存在する。そこで、これらの配列に結合するタンパク質cDNAクローニングをまず酵母One-hybrid systemにより行った。得られたpositive clonesをさらにtwo-hybris systemによりC-MYCと結合するものを更にスクリーニングしたところ、得られたcDNAはラットCBF-Cのヒトホモログであった。CBFはA,B,Cの3量体より構成され、CBF-Bが直接CAAT配列に結合する。酵母内にはCBF-A,B,Cのホモログが存在するために、酵母内でC-MYC,CBF-C,CBF-A,B酵母ホモログの結合によりCBF-Cが単離されたと考えられる。C-MYC,各CBFを大腸菌内で発現後、精製したタンパク質を用いて、in vitroで結合実験を行ったところ、C-MYCはCBF複合体形成を拮抗的に阻害することが判明した。CAAT配列はhsp70遺伝子の転写を正に制御するが、ここにC-MYCを導入すると転写抑制する現象を一致する。これはhsp70発現制御に関して重要な知見といえる。

研究成果

• [文献書誌] Iida, M.: "Induction of apoptosis by MSSP, C-MYC binding proteins." Biol. Pharm. Bull.20. 10-14 (1997)
• [文献書誌] Taira, T.: "A novel G1/S-specific enhancer identified in the human heat shock protein 70 gene" J. Biol. Chem.(in press.). (1997)
• [文献書誌] Tsuchiya, T.: "Ku antigen binds to Alu family DNA and represses transcription." J. Biol. Chem.(in press.). (1997)
• [文献書誌] Maeda, J.: "AMY-1, a novel C-MYC binding protein that stimulates transcription and transforming activities of C-MYC" Nature. (in press.). (1997)
• [文献書誌] Nagakubo, D.: "DJ-1, a novel oncogene product which transforms mouse NIH3T3 cells in cooperation with H-ras." Biochem. Biophy. Res. Comm.(in press.). (1997)