| 研究概要 |
真核細胞の大きな特徴のひとつは,膜で囲まれた細胞内コンパートメントを形成することである.真核細胞のモデル系である出芽酵母Saccharomyces cerevisiaeを用いた液胞コンパートメント構築の分子機構の解析において,二つの異なったシンタクシン様分子,Vam3pとPep12pが異なる機能を果たしながら液胞形成に関与していること,また,液胞可溶性タンパク質と液胞膜タンパク質の局在化には異なる機構が関与している.
1.VAM3遺伝子の破壊株、PEP12遺伝子破壊株を作製,さらに両遺伝子が欠損した変異株(pep12vam3)を得た.
2.これらの突然変異株の解析の結果、液胞膜タンパク質ALPの液胞への局在化にはVam3pの機能が,また可溶性タンパク質,PrA,PrB,CPYの局在化にはPep12pの機能が必須であることを明らかにした.
3.anti-ALP抗体,anti-PrA抗体を用いた二重蛍光標識により,vam3変異株ではこれらの二種のタンパク質が異なるコンパートメントに局在化していることが示された.
4.Pep12pの解析を進めるため,HA-epitopeを導入するin vitro突然変異法を開発し,Pep12pを検出する系を作製した.
|
