| 研究概要 |
本研究はチラコイド膜結合型アスコルビン酸ペルオキシダーゼ(APX)のチラコイド膜輸送シグナルを同定しようとするものである.カボチャ子葉からチラコイド膜融合型APXとストロマ局在型APXのcDNAクローニングを行い、その塩基配列の決定下.その結果,両酵素はN末端側にクロロプラストへの輸送ペプチドをもつタンパク質として合成されること.その一次構造に関して,ストロマ局在型APXは、チラコイド膜結合型APXのC末端貫通領域を欠く以外、同酵素と全く一致していた.Southern blot解析及び両APXの遺伝子構造の解析から、ストロマ局在型APXとチラコイド膜結合型APXのmRNAは、同一遺伝子からalternative splicingにより生成することが明らかとなった。またこのalternative splicingは組織の違いおよび光照射によって調節をうけていることが明らかとなった.この環境変化によるalternative splicingの調節は未だ報告されていない新規の調節機構であり,植物の環境応答において,重要な役割を果たしていることが推測される.この知見は、チラコイド膜輸送シグナルがチラコイド膜結合型APXのC末端374-421アミノ酸の範囲に局在していることを示しているので,現在この部分とレポーター遺伝子とのキメラタンパク質を発現させた形質転換タバコを作成して,発現産物の細胞内局在性を検討している.この実験系を用いて,チラコイド膜結合型APXのc末端にある輸送シグナルの同定を目指している。
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