研究課題/領域番号 |
08F08420
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研究種目 |
特別研究員奨励費
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配分区分 | 補助金 |
応募区分 | 外国 |
研究分野 |
分子生物学
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研究機関 | 岡山大学 |
研究代表者 |
上田 均 岡山大学, 大学院・自然科学研究科, 教授
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研究分担者 |
SARHAN M.M. 岡山大学, 大学院・自然科学研究科, 外国人特別研究員
SARHAN M. M. 岡山大学, 大学院・自然科学研究科, 外国人特別研究員
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研究期間 (年度) |
2008 – 2010
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研究課題ステータス |
完了 (2010年度)
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配分額 *注記 |
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
2010年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2009年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2008年度: 300千円 (直接経費: 300千円)
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キーワード | Blimp-1 / 転写抑制 / 相互佐用因子 / 精製 / 相互作用因子 |
研究概要 |
昨年までにBlimp-1と相互作用する因子の同定をおこない、ヒストンH4がBlimp-1結合因子として同定することに成功した。この結果を確かめるために、Flagタグ付きのBlim-1を熱ショックコントロール下に胚の時期に発現させ、その核抽出液からBlimp-1複合体を精製した。次に精製した複合体画分をSDSポリアクリルアミドグラジエントゲル電気泳動法を用いて広い範囲で分子量による分離をおこなった後、得られたバンドの位置のタンパク質を質量分析装置で解析した。その結果、ヒストンH4由来のペプチドはその予想される分子量の位置では検出されなかったが、Blimp-1のバンドの位置にあるタンパク質を解析したところ検出された。この結果から、Blimp-1とヒストンH4は共有結合していることが示唆された。 この結果をさらに確かめるために、Flagタグ付きのBlim-1を発現させたショウジョウバエ胚の核抽出液をヒストンH4抗体で免疫沈降した後にSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動をおこない、Flagタグ抗体を用いたウエスタンブロット法でBlinp-1の検出を試みたところ、シグナルは弱いもののBlimp-1の分子量の位置にバンドが検出された。この結果から、Blimp-1とヒストンH4が結合することを示す結果が支持された。 一方、Blimp-1が転写活性化のポテンシャルを与えることを確認するため、φ31インテグレースを用いたシステムでFTZ-F1プローモーターとLacZ融合遺伝子をゲノムの特定の部位に挿入し、FTZ-F1プローモーターのBlimp-1結合部位への変異導入の影響を調べた。その結果、Blimp-1の結合部位の転写活性化への関与が認められ、Blimp-1が転写活性化のポテンシャルを与える以前の結果が支持された。
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