| 研究課題/領域番号 |
09257215
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| 研究種目 |
重点領域研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
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研究代表者 |
古川 哲史 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助手 (80251552)
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| 研究分担者 |
内田 信一 東京医科歯科大学, 医学部, 助手 (50262184)
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| 研究期間 (年度) |
1997
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| 研究課題ステータス |
完了 (1997年度)
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| 配分額 *注記 |
1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
1997年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | カリウムチャネル / 細胞骨格 / アクチン / 蛋白-蛋白相互作用 / 酵母2ハイブリッド / パッチクランプ |
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| 研究概要 |
ABCトランスポーターのなかのスルフォニルウレア受容体(SUR)のNBF1・NBF2周辺のアミノ酸配列と相互作用する蛋白を酵母2ハイブリッドスクリーニング法にて探索するという角度からABCトランスポーターの機能調節を検討し以下の結果を得た。
1.膵臓型SURであるSUR1、心臓・神経型SUR2のNBF1・NBF2を含むバイトを作成し膵臓、心臓、脳のcDNAライブラリー各100万コロニーをスクリーニングしたところ、心臓・神経型SUR2のNBF1周辺配列と結合する蛋白をコードするcDNAが心臓・脳cDNAライブラリーからそれぞれ2種類単離された。一方は細胞膜Ca-ATPaseであり、他方は未知のcDNAであった。哺乳動物細胞2ハイブリッドアッセイを行った結果未知のcDNAは哺乳動物細胞でもSUR2のNBF1と相互作用することが、Ca-ATPaseは明確な結果が得られなかった。
2.単離された未知cDNAのmRNAは検討したすべての組織に存在し、中でも心臓における分布が最も豊富であった。
3.このcDNAの全塩基配列を決定すべく海馬cDNAライブラリーをスクリーニングしたところopen reading frameを含む未知のcDNAが単離されこれはalternative splicingによる4種類のアイソフォームが存在することが判明した。
4.SUR1と未知蛋白との相互作用にはSUR1のNBF1およびその直後のGAG trinucleotide repeatによりコードされるpoly-glutamateを中心としたマイナスに荷電したアミノ酸配列が必要であった。
5.この未知の蛋白がABCトランスポーターの他のメンバーはSUR1,CFTR,MDR1のNBF1およびNBF2とは相互作用せずこの共役はSUR2に特異的であった。
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