| 研究概要 |
実験に用いるベロ毒素1(VT1)とベロ毒素2(VT2)を腸管出血性大腸0157:H7からNodaらの方法
((1)Noda,M.et al.Purification and some properties of Shiga-like toxin from Escherichia coli O157:H7 that is immunologically identical to Shiga toxin.Microb.Pathogenesis 2:339-349,1997.(2)Takeda,Y.et al.Vero toxins(Shiga-like oxins)produced by Escherichia coli O157:H7.Bacterial Protein Toxins(Fehrenbach,F.J.et al.eds)pp.367-374,1988,Gustav Fischer Verlag,Stuttgart)で得た。さらに精製VT1とVT2を迅速に得る方法を開発した。この方法は、ハト卵白糖蛋白をCNBr-Activated Sepharose 4Bにカップリングしたカラムを作製し、これに0157:H7の菌体破砕物をアプライし、VT1を吸着させた後に溶出するもので、高い活性を保持した精製VT1が効率よく得られた。同様に0157:H7の培養液を用いることにより精製VT2を簡単に得ることが出来た。
精製VTの毒性を効率良くみるために、従来用いてきたベロ細胞に対する致死活性を測定する方法に加えて、VTのもつ蛋白合成に対する阻害活性を測定する簡便な方法を確立した。この方法はウサギ網状赤血球のlysateを用いて、VTがリボゾーマルRNAの4,324番目のアデノシンからアデニンを遊離させて蛋白合成を阻害するのを[^<14>C]ロイシンを用いて測定するものである。
ベロ細胞に対するVTの致死作用を測定する系、及びウサギ網状赤血球に対するVTの蛋白合成阻害作用を測定する系の二つの系を用いて、VTの作用を抑制する物質のスクリーニングを行なった結果、ケイヒの水抽出画分と白子蛋白抽出画分にVTの作用抑制する物質が存在することを示唆するデータが得られた。
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