| 研究課題/領域番号 |
09557021
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
実験病理学
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
北澤 理子 神戸大学, 医学部, 講師 (00273780)
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| 研究分担者 |
北澤 荘平 神戸大学, 医学部, 講師 (90186239)
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
8,800千円 (直接経費: 8,800千円)
1998年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1997年度: 7,500千円 (直接経費: 7,500千円)
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| キーワード | 閉経後骨粗鬆症 / 破骨細胞 / ストローマ細胞 / Differential Display法 / RANKL / 遺伝子プロモータ領域 / 組織分子雑種法 / マウス / Differential Display / cDNAクローニング |
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| 研究概要 |
破骨細胞形成において骨芽細胞系の果たす役割は、1)骨髄造血系細胞〜破骨細胞系の増殖に必要な液性因子の供給、2)破骨細胞への最終分化に不可欠な直接接触を介する相互作用、の2段階が想定される。本計画において、2)の観点より、マウス骨髄ストローマ細胞ST2と骨髄細胞の共存培養において、ST2細胞の破骨細胞形成支持能の推移(ST2細胞の継代数依存的)に着目し、Differential DispIay法にて破骨細胞形成能と連動して発現の推移する分子の分離を目指した。
一方、1998年破骨細胞分化因子が分離同定されたが(RANKL/TRANCE/OPGL/ODF:H.Yasuda et al.,PNAS,D.Lacy et al.,Cell,1998)、私どもは破骨細胞分化因子(RANKL.)遺伝子5'上流プロモータ領域をクローニングし、RANKL遺伝子発現調節機序について検討した。特にST2細胞の継代数依存的な破骨細胞形成支持能がRANKL遺伝子発現レベルによって既定されること示し、遺伝子プロモータ領域のメチル化修飾が関与する可能性を見い出した。成果の一部は既に投稿し論文印刷中である。今後RANKL.遺伝子発現調節機序の詳細について研究を進めていく。さらに、サイトカインや上記遺伝子の発現を形態学的に評価するために、硬組織を用いた組織分子雑種法の基礎的検討を行ってきた。特に組織上でのmRNAの保存に適した固定法・脱灰法の条件設定やPCRを利用した高感度・特異的なプローブ作製方法について多くの知見を集積し、脱灰骨標本を用いた組織分子雑種法にて骨形成因子(BMP)や血小板由来増殖因子(PDGF)の局在を示すことが可能となった。以上の成果の一部は第86回・87回日本病理学会総会、第15回・16回日本骨代謝学会、第19回・20回米国骨代謝学会議にて報告した。
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