蛋白分解酵素阻害物質SLPIのマウス遺伝子操作による気道炎症の修飾

• 研究課題/領域番号: 09557054
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 展開研究
• 研究分野: 呼吸器内科学
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 渡辺 彰 (1999) 東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (70220861); 阿部 達也 (1997-1998) 東北大学, 加齢医学研究所, 講師 (70222651)
• 研究分担者: 菊地 利明 (菊池 利明) 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (10280926) ; 八重柏 政宏 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (70261477) ; 益田 覧一 帝人株式会社, 創薬第二研究所, 主任研究員 ; 益田 賢一 帝人株式会社, 創薬第二研究所, 主任研究員
• 研究期間 (年度): 1997 – 1999
• 研究課題ステータス: 完了 (1999年度)
• 配分額: 8,400千円 (直接経費: 8,400千円); 1999年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円); 1998年度: 2,800千円 (直接経費: 2,800千円); 1997年度: 3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
• キーワード: SLPI / プロテアーゼインヒビター / 遺伝子ターゲッティング / ノックアウトマウス / 気道炎症 / 組織分布 / アデノウイルスベクター / 遺伝子構造 / SLSI / マウス / 組み換えタンパク / 酵母 / 気道 / 細菌性肺炎 / ブレオマイシン肺傷害 / HGF / 遺伝子発現 / マウス遺伝子

研究概要

Secretory leukoprotease inhibitor(SLPI)には,単にプロテアーゼインヒビターとしてでなく,炎症を修飾する作用をもつことが,最近報告されている.本研究申請に際し,SLPIの生理的機能とその治療への応用の可能性を検討する目的で,我々がクローニングしたマウスSLPI遺伝子を用いて,(1)マウスSLPIの組換えタンパク(とその抗体)の作製,(2)遺伝子ターゲッティングを計画した.それぞれの計画において得られた結果は以下のとおりである.
・マウスSLPIペプチドの合成完了
・マウスSLPIペプチドを免疫源としたウサギ抗マウスSLPIポリクローナル抗体の完成
・抗マウスSLPI抗体による免疫組織染色法の確立と肺炎球菌肺炎におけるSLPI発現細胞の同定
・in situ hybridization法による,肺炎球菌肺炎におけるSLPI発現細胞の同定と経時的変化の解明
・in situ hybridization法による,炎症性細胞におけるSLPI発現の証明
・マウスSLPI発現レトロウイルスベクターの開発
・マウスSLPI発現レトロウイルスベクターによる肺癌の治療法の確立
・マウスSLPI発現アデノウイルスベクターの開発
・マウスSLPI発現アデノウイルスベクターによるマウスSLPI組み換えタンパク(とその抗体の作製)
・マウスSLPI遺伝子のtargeting constructによるmouse embryonic stem cell(ES cell)の形質導入,および形質導入した細胞のクローニング
近い将来ノックアウトマウスの完成により,SLPIの持つ未知の生理的機能を完全に解明できると考えている.

研究成果

• [文献書誌] Tatsuya Abe,Akira Watanabe: "Bacterial Pneumonia Causes Augmented Expression of the Secretory Leukoprotease Inhibitor Gene in the Murine Lung"Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156. 1235-1240 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Toshiaki Kikuchi,Tatsuya Abe: "Structure of the Murine Secretory Leukoprotease Inhibitor(Slpi)Gene and Chromosomal Localization of the Human and Murine SLPI Genes"Am. J. Respir. Cell Mol. Biol.. 19. 875-880 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Tatsuya Abe, Yasuyuki Tominaga, Toshiaki Kikuchi, Akira Watanabe, Ken Satoh, Yuji Watanabe, and Toshihiro Nukiwa: "Bacterial Pneumonia Causes Augmented Expression of the Secretory Leukoprotease Inhibitor Gene in the Murine Lung"Am. J. Respir. Crit. Care Med.. 156. 1235-1240 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Toshiaki Kikuchi, Tatsuya Abe, Sachiko Hoshi, Nobumichi Matsubara, Yasuyuki Tominaga, Ken Satoh, and Toshihiro Nukiwa: "Structure of the Murine Secretory Leukoprotease Inhibitor (Slpi) Gene and Chromosomal Localization of the Human and Murine SLPI Genes"Am. J. Respir. Cell Mol. Biol.. 19. 875-880 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Toshiaki Kikuchi: "Structure of the murine secretory leukoprotease inhibitor(Slpi)gene and chromosomal localization of the human and murine SLPI genes." Am.J.Respir.CellMol.Biol.19・6. 875-880 (1998)
• [文献書誌] Tsutomu Sakuma: "ONO-5046 is a potent inhibitor of neutrophil elastase in human pleural effusion after lobectomy" Eur.J.Pharmacol.353. 273-279 (1998)
• [文献書誌] 菊地 利明: "遺伝子の構造と局在から推定される好中球エラスターゼ阻害活性のredundancy" 厚生省特定疾患呼吸器系疾患調査研究班平成9年度報告書. 51-55 (1998)
• [文献書誌] 貫和 敏博: "慢性気道障害防御機構としての分泌型白血球蛋白分解酵素阻害物質の遺伝子工学的研究" 平成9年度喫煙科学財団研究年報. 456-461 (1998)
• [文献書誌] Toshiaki Kikuchi: "Cis-acting region associated with lung cell-specific expression of the secretory leukoprotease imhibitor gene" Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.17・3. 361-367 (1997)
• [文献書誌] Tatsuya Abe: "Bacterial pneumonia causes augmented expression of the secretory leukoprotease inhibitor gene in the murine lung" Am.J.Respir.Crit.Care Med.156・4. 1235-1240 (1997)
• [文献書誌] Masahiro Yaekashiwa: "Simultaneous or delayed administration of hepatocyte growth factor equally represses the fibrotic changes in murine lung injured by bleomycin" Am.J.Respir.Crit.Care Med.156・6. 1937-1944 (1997)
• [文献書誌] Hiroaki Mitsuhashi: "Potency of truncated secretory leukoprotease inhibitor assessed in acute lung injury models in hamsters" J.Pharmacol.Exp.Ther.282・2. 1005-1010 (1997)
• [文献書誌] S.Yasuoka: "Purification,characterization,and localization of a novel trypsin-like protease found in the human airway" Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.16・3. 300-308 (1997)