| 研究課題/領域番号 |
09660331
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
基礎獣医学・基礎畜産学
|
|---|
| 研究機関 | 麻布大学 |
|---|
研究代表者 |
藤瀬 浩 麻布大学, 獣医学部, 教授 (40106232)
|
|---|
| 研究分担者 |
落合 秀治 麻布大学, 生物科学総合研究所, 助手 (20247307)
池田 輝雄 麻布大学, 獣医学部, 助教授 (60151297)
代田 欣二 麻布大学, 生物科学総合研究所, 教授 (70147974)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
|
| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
1998年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1997年度: 2,700千円 (直接経費: 2,700千円)
|
|---|
| キーワード | 犬 / カリウム / アミノ酸 / 赤血球 / 赤芽球 / 遺伝子 / K・Cl共輸送 / 水チャネル / K-Cl共輸送 / K-CI共輸送 |
|---|
| 研究概要 |
赤血球前駆細胞調製:犬遺伝性高Kお-よび低アミノ酸輸送赤血球保有犬末梢血からパコールを用いて単核球画分を分取し、次にPHA添加白血球培養上清を加えた培地(第1段階培養)、エリスロポエチン添加培地(第2段階培養)で血球前駆細胞を誘導した。第2段階でバーストしてくる細胞には、ヘモグロビン、グリコホリンが検出され、赤血球系への分化が確認された。
膜輸送体の遺伝子クローニング:上記赤血球前駆細胞あるいは犬腎より、K-Cl共輸送体、水チャネルAQP1遺伝子cDNA全長をRT-PCR、RACE法ほかを用いて、クローニングし、グルタミン酸/アスパラギン酸輸送体のうちGLASTの部分cDNAをRT-PCRを用いて赤血球前駆細胞より検出した。犬赤血球前駆細胞K-Cl共輸送体のアミノ酸配列は報告されている他の動物臓器由来のものと96%前後の相同性であり、水チャネルAQP1のアミノ酸配列は他の動物と90-95%の相同性があった。犬赤芽球GLASTの部分cDNAはヒト、ラットの脳由来のものと85-92%の相同性があった。したがって、いずれも目的の遺伝子がクローニングされたと判断した。
細胞での発現:アフリカツメガエル卵母細胞に水チャネルAQP1のmRNAを注入すると、水輸送が活性化され、クローニングした犬AQP1が水輸送を行うことが示された。腎細胞由来培養細胞株HEK293にK-Cl共輸送体遺伝子を導入する系を確立した。今後、これらの遺伝子のなかで犬に特異的な変異をsite directed mutagenesisなどの手法で修飾し、その生理的意義を検討する。
|
