| 研究概要 |
1, ピルビン酸キナーゼ(PK)L遺伝子の転写制御領域のL-IIに結合する熱安定な核タンパク質を精製し,NF1ファミリーに属するNF1LとNF1/Red1であることを明らかにした。これらの転写因子はHNF4とほぼ同じ配列に結合し,HNF4に拮抗的に作用した。しかし,L-IIと同じような機能をもつS14遺伝子のアクセサリーエレメントにはNFlファミリーのタンパク質のみが結合したので,NF1ファミリーのタンパク質が炭水化物応答性に関与することが示唆された。
2, PKL遺伝子の転写制御領域のL-III(炭水化物応答性領域)に結合するラットの転写因子のcDNAクローニングを酵母のワンハイブリドシステムを用いて行い,Hexが単離された。HexはL-IIIに直接に作用する転写因子ではなかったが,PKL遺伝子のL-IやL-IIに作用するHNF1やHNF4の活性を上げることが認められた。しかしその意義や機構は不明である。Hexは肝細胞の分化や分化状態の維持に関与している可能性が示唆された。また,Hexは転写抑制因子であることを明らかにし,その抑制ドメインを同定するとともに,ホメオドメインはDNA結合に関与することを示した。
3, PKL遺伝子の転写制御領域のL-IIIに結合するラットの転写因子をラット肝臓の核抽出液から精製した。精製標品はSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動で26と24kDaの大きさを示し,これらはUVクロスリンク法によりいずれもL-IIIに特異的に結合することが判明した。また,両タンパク質とも熱不安定でや,抗体との反応性からUSFではないことが示された。
4,PKM遺伝子の転写制御領域(ボックスA,B,C)の全プロモーター活性に対する貢献度を検討した結果,ボックスBとCが重要な役割を演じていることが明らかになった。ボックスAとBにはSp1ファミリーのSp1やSp3が,ボックスCにはNF-Yが結合することが明らかになった。
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