| 研究課題/領域番号 |
09670237
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
実験病理学
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| 研究機関 | 慶応義塾大学 |
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研究代表者 |
福間 真理子 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (60101995)
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| 研究分担者 |
山田 健人 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (60230463)
梅澤 明弘 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (70213486)
秦 順一 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (90051614)
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
1998年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1997年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
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| キーワード | EC細胞 / モノクロナール抗体 / 糖蛋白質 / プロテオグリカン / 糖脂質 |
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| 研究概要 |
胎児性癌細胞(EC細胞)が分化または増殖する際細胞膜分子が重要な機能を担っているという想定のもとに我々はEC細胞株(NCR-G3細胞)を免疫原として性格の異なる種々の抗体を確立した。本研究では確立したモノクロナール抗体の認識する抗原を明らかにし、胚細胞腫瘍亜群の病態診断、治療法の新しい手段を開発することを目的とした。確立されたモノクロナール抗体のうち6E2抗体および4C4抗体は胚細胞腫瘍の中でも胎児性癌に特異的に反応する事が見いだされた。生化学的検討を加えた結果、6E2抗体の認識する抗原は、シアル酸を持つ糖鎖であることが分かった。又6E2抗原は塩基性エタノール:クロロホルム混液に溶出されてきたことにより6E2抗原は非還元末端にシアル酸を持つ酸性糖脂質であることが示唆された。4C4-Mabの認識する抗原(4C4抗原)は免疫組織学的検索において、胎児性癌に特異的に発現していて、その他の胚細胞腫瘍や非胚細胞腫瘍においてはその発現は認められなかった。正常組織においては、下垂体、胃、膵における内分泌細胞に発現していた。EC細胞において4C4抗原は細胞膜に強く発現しており、免疫電子顕微鏡的検索においても細胞膜外層に局在することが分かった。生化学的に4C4抗原は細胞をTunicamycin処理することによって消失すること、また、過ヨウ素酸処理、蛋白分解酵素処理によって抗原性を失うことにより糖蛋白を認識していてゲルクロマトグラフィで2000kDa以上の分子量を持つ巨大分子であった。細胞粗抽出液を4Mguanidineで処理した非会合条件で4C4抗原は陰イオン交換力ラムに吸着し0.5MNaClで溶出される分画に存在した。これをchondroitinase ABC消化すると約85kDaの分子量を持つ蛋白が生成することから酸性プロテオグリカンのコア蛋白であることが明らかとなった。
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