トキソプラズマ感染細胞におけるシャペロン、トランスポーターの抗原提示機能の解析

• 研究課題/領域番号: 09670264
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 寄生虫学(含医用動物学)
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 青才 文江 千葉大学, 医学部, 助教授 (80150316)
• 研究分担者: 矢野 明彦 千葉大学, 医学部, 教授 (20135122)
• 研究期間 (年度): 1997 – 1998
• 研究課題ステータス: 完了 (1998年度)
• 配分額: 3,200千円 (直接経費: 3,200千円); 1998年度: 600千円 (直接経費: 600千円); 1997年度: 2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
• キーワード: トキソプラズマ / シャペロン / HSP70 / トランスポーター / 抗原提示機能分子 / 遺伝子ワクチン / SAG1遺伝子 / 抗原提示細胞 / 表面プラズモンレゾナンス / シャベロン / H_<SP>70 / MHC-ペプチド複合体

研究概要

我々はトキソプラズマ原虫に代表される細胞内寄生原虫感染における感染細胞内の抗原提示機構について研究を進めており、今までに1)トキソプラズマ感染細胞がトキソプラズマ抗原を細胞内で抗原処理しMHCクラスIあるいはクラスII分子結合オリゴペプチド抗原として感染細胞特異的CD8^+CTL、CD4^+増殖性T細胞、CD4^+CTLに抗原提示することを明らかにし、2)トキソプラズマ感染細胞特異的CTLが認識するMHCクラスI分子結合オリゴペプチド(T細胞エピトープ)のアミノ酸解析に成功し、表面プラズモンレゾナンスにより合成トキソプラズマSAGlベプチド289-297が感染細胞特異的CD4^+CTLに強い抗原性を示すT細胞エピトープであることを報告した(Biochem.Biophys.Res.Commun.236:257-61,1997)。
本研究ではさらに、感染細胞内抗原処理・提示機能分子である分子シャペロン、トランスポーターの抗原処理・提示機能の解析を進め、3)細胞内蛋白質のフォールディング、オリゴマー形成、分子の膜貫通・移動などの抗原提示機序に不可欠であり、且つその分子構造がMHCクラスI分子に酷似する分子シャペロンである熱ショック蛋白質HSP70がトキソプラズマ感染宿主細胞における抗原提示機能分子として存在し、トキソプラズマ感染ヒトメラノーマから得たHSP70が感染細胞特異的CTLのエピトープとなることを明らかにした(Microbiol.Immunol.41:553-561,1997)。又さらに、トキソプラズマ表面抗原や抗原提示機能分子による抗原提示細胞の抗原提示能修飾により誘導される細胞性免疫反応を介したワクチン開発を目的として、トキソプラズマ主要表面抗原SAGl遺伝子をマウスTAPトランスポーター欠損腫瘍細胞株RMA.Sに遺伝子導入した。RMA.Sは強力な抗原提示能をもち、このSAGl遺伝子導入抗原提示細胞株でマウスに免疫することにより、トキソプラズマ感染細胞特異的細胞性免疫が誘導されトキソプラズマ強毒株(RH株)感染に対するex-vivoワクチン効果が得られることを明らかにし報告した(9^<th> International Congress of Parasitology Tada,I.et.al.(eds)Monduzzi Editore,p69-75,1998;Microbiol.Immunol.43(1),87-91.1999)。

研究成果

• [文献書誌] Mun, H-S., Aosai, F.and Yano, A.: "Role of Toxoplasma gondii HSP70 and Toxoplasma gondii HSP30/bag1 in antibody formation and prophylactic immunity in mice experimentally infected with Toxoplasma gondii." Microbiol. Immunol. (in press). (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Aosai, F., Mun, H-S., Norose, K., Chen, M., Hata, H., Kobayashi, M., Kiuchi, M., Stauss, H.J.and Yano, A.: "Protective immunity induced by vaccination with SAG1-gene transfected cells against Toxoplasma gondii-infection in mice." Microbiol. Immunol. 43(1). 87-91 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Yui, K.and Yano, A: "Humoral immune responses against members of the hsp70 family in Toxoplasma gondii" Jpn.J.Trop.Med.Hyg. 26(4). 305-318 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Hata, H., Niimura, M., Yano, A.: "Angiostrongylus costaricensis Purine and Pyrimidine nucleotide biosylheses." J.Vet.Med.Sci. 60(10). 1153-1155 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Yamashita, K., Yui, K., Ueda, M., and Yano, A.: "CTL-mediated lysis of Toxoplsama-infected target cells does not lead to death of the intracellular parasites." Infect. Immun. 60(10). 4651-4655 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Luo W., Aosai F., Ueda M., Yamashita K., Shimizu K., Sekiya S.and Yano A.: "Kinetics of changes in parasite load in susceptible and resistant mice infected with an avirulent strain of Toxoplasma godii by using quantitative competitive PCR." J.Parasitol. 83(6). 1070-1074 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] He N., Aosai F., Luo W., Ueda M., Yang T-H., Yamashita K., Souei Sekiya and Yano A.: "Parasite load in pregnant mice infected by Toxoplasma gondii assayedby quantitative competitive-PCR." Pasitol. Int. 46. 143-147 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Yano, A., Aosai F., Yang T-H., He, N., Mun, H-S., Liu, H., Inoko, H.and Norose, K.: "Correlation between direct binding a bility of syntbetic T.gondii SAG1 peptides to HLA-A2 measured by a sensor plasmon resonance and antigenicity of the peptides for T.gondii-induced cell-specific CTL." Biochem. Biophys. Res.Commun. 236. 257-261 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] He, N., Aosai, F., Mun, H-S., Sekiya, S.and Yano, A.: "Cytokine production assayed by RT-PCR in pregnant mice infected by Toxoplasma gondii as a model of congenital toxoplasmosis." Jpn.Trop.Med.Hyg. 25. 59-67 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Yang, T-H., Aosai, F., Norose, K., Mun, H-S.and Yano, A.: "Heat shock cognate protein 71-associated peptides function as an epitope for T.gondii-specific CD^<++>CTL." Microbiol. Immunol.41(1). 553-561 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 青才文江, 矢野明彦: "抗原提示細胞系とその異常.網内系の最近の考え方." 日常診療と血液. 7(2). 47-58 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 矢野明彦, 文 恵聖, 陳 梅, 青才文江: "免疫グロブリン別トキソプラズマ抗体測定用試薬トキソIgM-EIA「生研」IgG-EIA「生研」 の評価." 臨床検査機器・試薬. 21(5). 533-538 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 矢野明彦, 青才文江: "原虫感染における抗原提示、日本における寄生虫学の研究6" 日本寄生虫学会編, 12 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 矢野明彦, 青才文江, 野呂瀬一美: "医療ジャーナル" 原虫感染症とサイトカイン.感染症とサイトカイン.今西二郎、笹田昌孝編, 19 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Aosai, F., Mun, H-S., Yang, T-H., Norose, K., Hata, H., Kobayashi, M., Chen, M., Saito, S., Rikihisa, N., Ichinose, M.and Yano, A.: "HSC70-mediated antigen presentation and ex-vivo gene vaccination with SAGl to Toxoplasma gondii-infection. ICOPAIX-9th International Congress of Parasitology, ed.Isao Tada, Somei Kojima, Moriyasu Tsuji." Blogna, Italy. Monduzzi Editore., 7 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] A.Yano, H-S.Mun, T-H.Yang, H.Hata, M.Kobayashi, K.Norose, S.Hayakawa, Y.Tagawa, Y.Iwakura, S.Nakazaki, Y.Nakazaki, S.Sekiya, A.Yamaura, H.Kubosawa, N.Yumoto, F.aosai.: "Roles of IFN-gamma in effector mechanisms and pathogenicity of HSPs in mice and human Intected with Toxoplasma gondii. ICOPAIX -9th International Congress of Parasitology, ed.Isao Tada, Somei Kojima, Moriyasu Tsuji." Blogna, Italy. Monduzzi Editore., 10 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Mun, H-S., Aosai, F.and Yano, A.: "Role of Toxoplasma gondii HSP70 and Toxoplasma gondii HSP30/bag1 in antibody formation and prophylactic immunity in mice experimentally infected with Toxoplasma gondii" Microbiol.Immunol.43 (5) (in press). (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Aosai, F., Mun, H-S., Norose, K., Chen, M., Hata, H., Kobayashi, M., Kiuchi, M., Stauss, H.J.and Yano, A.: "Protective immunity induced by vaccination with SAG1-gene transfected cells against Toxoplasma gondii infection in mice." Microbiol.Immunol.43 (1). 87-91 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Aosai, F., Mun, H-S., Yang, T-H.Norose, K., Hata, H., Kobayashi, M., Chen, M., Saito, S., Rikihisa, N., Ichinose, M.and Yano, A.: "HSC70-mediated antigen presentation and ex vivo gene vaccination to Toxoplasma gondii infection." ICOPAIX.Tada, I., Kojima, S.and Tsuji, M.(eds). Monduzzi Editore, Blogna, Italy. 69-75 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yano, A., Mun, H-S., Yang, T-H., Hata, H., Kobayashi, M., Norose, K., Hayakawa, S., Tagawa, Y., Iwakura, Y.Nakazaki, S., Nakazaki, Y., Sekiya, S., Yamaura, A., Kurosawa, H., Yumoto, N., and Aosai, F.: "The roles of IFN-Y in effector mechanisms and pathogenicity of HSPs in mice and human infected with Toxoplasma gondii." ICOPAIX.Tada, I., Kojima, S.and Tsuji, M.(eds). Monduzzi Editore, Blogna, Italy.457-466 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yui K.and Yano A.: "Humoral immune responses against members of the hsp70 family in Toxoplasma gondii." Jpn.J.Trop.Med.Hyg.26 (4). 305-318 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hata, Hidekazu, Niimura Munetoshi, Yano Akihiko.: "Angiostrongyuis costarncensis : Purine and Pyrimidine nucleotide biosyntheses." J.Vet.Med.Sci.60 (10). 1153-1155 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yamashita, K., Yui, K., Ueda, M., and Yano, A.: "CTL-mediated lysis of Toxoplasma-infected target cells does not lead to death of the intracellular parasites." Infect.Immun.60 (10). 4651-4655 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Luo, W-T,Aosai, F., Ueda, M., Yamashita, K., Shimizu, K., Sekiya S.and Yano, A.: "Kinetics in parasite abundance in susceptible and resistant mice infected with an avirulent strain of Toxoplasma gondii by using quantitative competitive PCR." J.Parasitol.83. 1070-1074 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] He, N., Aosai, F., Luo, W-T,Ueda, M., Yang, T-H., Yamashita, K., Sekiya, S.and Yano, A.: "Parasite load in pregnant mice infected by Toxoplasma gondii as sayed by quantitative competitive-PCR." Parasitology International. 46. 143-147 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yano, A., Aosai, F., Yang, T-H., He, N., Mun, H-S., Liu, H., Inoko, H.and Norose, K.: "Correlation between direct binding ability of synthetic T.gondii SAG1 peptides to HLA-A2 measured by a sensor plasmon resonance and antigenicity of the peptides for T.gondii induced cell-specific CTL." Biochem.Biophys.Res.Commur. 236. 257-261 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] He, N., Aosai, F., Mun, H-S., Sekiya, S.and Yano, A.: "Cytokine production assayed by RT-PCR in pregnant mice infected by Toxoplasma gondii as a model of congenital toxoplasmosis." Jpn.J.Med.Hyg.25. 59-67 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yang, T-H., Aosai, F., Norose, K., Mun, H-S.and Yano, A.: "Heat shock cognate protein 71-associated peptidess function as an epitope for T.gondii specific CD4+CTL." Microbiol.Immunol.41. 553-561 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Mun,H-S.,Aosai,F.and Yano,A.: "Role of Toxoplasma gondii HSP70 and Toxoplasma gondii HSP30/bag1 in antibody formation and prophylactic immunity in mice experimentally infected with Toxoplasma gondii." Microbiol.Immunol.in press.(1999)
• [文献書誌] Aosai,F.,Mun,H-S.,Norose,K.,Chen,M.,Hata,H.,Kobayashi,M.,Kiuchi,M.,Stauss,H.J.and Yano,A.: "Protective immunity induced by vaccination with SAG1-gene transfected cells against Toxoplasma gondii-infection in mice." Microbiol.Immunol.43(1). 87-91 (1999)
• [文献書誌] 矢野明彦、文 恵聖、陳 梅、青才文江: "免疫グロブリン別トキソプラズマ抗体測定用試薬トキソIgM-EIA「生研」、IgG-EIA「生研」の評価" 臨床検査機器・試薬. 21(5). 533-538 (1989)
• [文献書誌] F.aosai,H-S.Mun,T-H.Yang,K.Norose,H.Hata,M.Kobayashi,M.Chen,S.Saito,N,Rikihisa,M.Ichionose,A.Yano.: "HSC70-mediated antigen presentation and ex-vivo gene vacclnation with SAG1 to Toxoplasma gondii-infection.ICOPAIX-9th International Congress of parasftology.ed.Isao Tada,Somel Kojima,Mortyasu Tsuji." Blogna,Italy.Monduzzi Editore., (1998)
• [文献書誌] A.Yano,H-S.Mun,T-H.Yang,H.Hata,M.Kobayashi,K.Norose,S.Hayakawa,Y.Tagawa,Y.Iwakura,S.Nakazaki,Y.Nakazaki,S.Sekiva,A.Yamaura,H.Kubosawa,N.Yumoto,F.Aosai.: "Roles of IFN-gamma in effector mechanisms and pathogenicity of HSPs in mice and human infected with Toxoplasma gondii.ICOPA IX-9th International Congress of Parasitology,ed.Isao Tada,Somel Kojima,Moriyasu Tuji." Blogna,Italy.Monduzzi Editore., 10 (1998)
• [文献書誌] Yang., T-H., Aosai,F., Norose,K., Mun,H-S. and Yano,A.: "Hert shock cognate protein 71-associated peptidess function as an epitope for T.gondii-specific CD4_+CTL." Microbiol.Immunol.41. 553-561 (1997)
• [文献書誌] He,N., Aosai,F., Mun,H-S., Sekiya,S. and Yano,A.: "Cytokine production assayedby RT-PCR in pregnant mice infected by Toxoplasma gongii as a model of congenital toxoplasmosis." Jpn.J.Trop.Med.Hyg.25. 59-67 (1997)
• [文献書誌] Yano,A., Aosai,F., T-H., He,N., Mun,H-S., Liu,H., Inoko,H. and Norose,K.: "Correlation between direct binding ability of synthetic T.gondii SAG1peptides to HLA-A2 measured by a sensor plasmon reasonance and antigenicity of peptides for T.gongii-induced cell-specific CTL" Biochemical and Biophysical reseach communications. 236. 257-261 (1997)
• [文献書誌] He,N., Aosai,F., Luo,W-T., Ueda,M., Yang,T-H., Yamashita,K., Sekiya,S. and Yano,A.: "Parasite load in pregnant mice infected by Toxoplasma gondii assayed by quantitative-competitive-PCR." Parasitology International. 46. 143-147 (1997)
• [文献書誌] Luo,W-T., Aosai,F., Ueda,M., Yamashita,K., Shimizu,K., Sekiya S. and Yano,A.: "Kinetics in parasite abundance in susceptible and resistant mice infected with an avirulent strain of Toxoplasma gondii by using quantitative competitive PCR." J.Parasitol.83. 1070-1074 (1997)
• [文献書誌] 矢野明彦、青才文江: "原虫感染における抗原提示、日本における寄生虫学の研究 日本寄生虫学会編" (印刷中),
• [文献書誌] 矢野明彦、青才文江、野呂瀬一美: "原虫感染症とサイトカイン、感染症とサイトカイン 今西二郎、笹田昌孝編" 医療ジャーナル, 19 (1998)