| 研究課題/領域番号 |
09670597
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
呼吸器内科学
|
|---|
| 研究機関 | 山形大学 |
|---|
研究代表者 |
中村 秀範 山形大学, 医学部, 講師 (30240675)
|
|---|
| 研究分担者 |
加藤 修一 山形大学, 医学部, 助手 (90260463)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,900千円 (直接経費: 2,900千円)
1998年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1997年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
|
|---|
| キーワード | インターロイキン8 / 気管支上皮細胞 / 遺伝子発現 / Promoter / Transcription Factors |
|---|
| 研究概要 |
本研究では気管支上皮細胞を対象にして、マクロライドによるIL-8遺伝子発現調節メカニズムについて検討した。TNF刺激は、BET-1A細胞にIL-8mRNAを発現誘導した。このIL-8mRNAの誘導はエリスロマイシン(EM)やクラリスロマシン(CAM)の前培養により濃度依存性に抑制された。CAMは、その前培養時間を長くすればするほど強くTNFによるIL-8遺伝子発現誘導を抑制した。この際の培養上清中のIL-8蛋白レベルも抑制されていることがELISA法にて確認された。CAMは、BET-1Aの細胞増殖に対しては影響を示さなかった。CAMは、TNFによって誘導されたIL-8mRNAのstabilityについては影響を示さなかった。IL-8遺伝子の5'-flanking部位は、プロモターとしての活性をもっており、特に-112までの領域まではminimum promoter activityが存在していた。TNF刺激は、これらのプラスミドのルシフェラーゼ活性を高めた。CAMは、TNFによるルシフェラーゼ活性の増加、つまりプロモター活性を抑制した。特にこの抑制はAP-1結合部位を含むpN130で有意であり、AP-1結合部位を含まないpN112では、有意の抑制は示さなかった。以上より、CAMによるTNF誘導IL-8遺伝子発現の抑制は、AP-1結合部位が関与している可能性が示唆された。次にゲルシフトアッセイにより、TNFによるAP-1結合蛋白の誘導がCAMによって影響されるか否かについて検討した。TNFはBET-1A細胞にNF-kB結合蛋白を誘導したが、CAMはこれに何の影響も及ぼさなかった。つまり、CAMはNF-kB結合部位の抑制示さなかった。一方、AP-1結合蛋白もTNFによって誘導されたが、CAMはこの誘導を抑制していた。つまりCAMは、AP-1結合部位を介してIL-8遺伝子の転写を抑制している可能性があることが示された。
|
