| 研究課題/領域番号 |
09670637
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
神経内科学
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| 研究機関 | 山形大学 |
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研究代表者 |
加藤 丈夫 山形大学, 医学部, 教授 (90194828)
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
1998年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1997年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | 筋萎縮性側索硬化症 / Hep SS-I / 脊髄 / スフェロイド / ヘパラン硫酸 / プロテオグリカン / ニューロポリペプチド・h3 / 運動ニューロン疾患 / HepSS-1 / IDPN |
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| 研究概要 |
HepSS-1が認識する物質はALSの病態に関与している可能性がある。したがって、本研究では、HepSS-1が認識する物質をヒト脊髄から分離・精製し同定する。
非神経疾患症例の脊髄ホモジネートを超遠心し、上清(TBS 上清)と沈渣を得た。沈渣は8M尿素を含むTBSを用いてホモジナイズし、超遠心後、上清を回収した(8M尿素上清)。 HepSS-1を一次抗体とするWestern blottingを行い、 TBS上清画分に約24kDa、8M尿素上清画分に約18kDaの陽性バンドを認めた。SDA―PAGE、 Western blotting、陰イオン交換カラムクロマトグラフィーおよび二次元電気泳動法を用い精製を進め、以下の結果を得た。1.TBS上清画分中の24kDa蛋白質のN末端アミノ酸配列はPVDLSKWSGPLSLQEVDEQPQHであった。これはneuropolypeptideh3のN末端アミノ酸配列と完全に一致した。2.特大二次元電気泳動装置を自作し、8M尿素上清画分中の18kDa蛋白質を単一スポットにまで分離・精製したがN末端はプロックされていた。3.18kDa蛋白質のN末端をプロックしている基は、アセチルセリン、アセチルトレオエンではなく、また、ホルミル基でもなかった。4.18kDa蛋白質はリシルエンドペプチダーゼによる消化に対して抵抗性を示した。
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