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プロピオン酸血症の病態解明 : バキュロウイルス蛋白発現系を用いた変異蛋白質の解析

研究課題

研究課題/領域番号 09670781
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 小児科学
研究機関東北大学

研究代表者

大浦 敏博  東北大学, 医学部, 助教授 (10176828)

研究分担者 呉 繁夫  東北大学, 医学部, 助手 (10205221)
研究期間 (年度) 1997 – 1998
研究課題ステータス 完了 (1998年度)
配分額 *注記
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
1998年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1997年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
キーワードプロピオン酸血症 / プロピオニルCoAカルボキシラーゼ / スプライス異常
研究概要

プロピオン酸血症は、プロピオニルCoAカルボキシラーゼ(PCC)欠損により引き起こされる有機酸代謝異常症である。PCCはα、β2つのサブユニットからなる複合酵素で、本症はいずれかのサブユニットの欠損により発症する。今回我々は6例のα鎖欠損患者の遺伝子解析を行ない以下の結果を得た。cDNAの解析では5つのミスセンス変異(R52W,Q272R,R374Q,P398L,W534L)と、2ヵ所の欠失(111bp del.,nt.1355-1465;103 bp del.,nt.1466-1568)、さらには3人の患者(168、330、409)ではnt.1209と1210の間に84bpの挿入が検出された。ゲノムDNAの解析で111bPの欠失に関してはその下流のイントロンの5′スプライス部位のG^<+1>→A変異が認められ、これによるエクソンスキッピングと考えられた。cDNA上で84bpをはさむプライマーを設計し対照及び6名の患者でPCRを行なったところ、患者330と409では正常のPCR産物(=216bp)に加え84bpの挿入をもつ300bpの産物が検出できた。驚くべき事には正常対照においても正常産物に加え300bPの産物がわずかながら検出できた。この84bp挿入のメカニズムを明らかにするためゲノムDNAを解析したところ84bpはイントロン中に存在しており、その5側と3側にはエクソン-イントロン接合部のコンセンサス配列であるAGとGTが存在していた。この領域を患者330、409で検索したが変異は見い出せなかった。84bpの挿入は正常でもわずかに生じるaberrant splicingであり原因変異ではないと考えられた。
次に、約2.0kbのαPCCcDNAをトランスファーベクターpBac3にサブクローン後、このプラスミドDNAlμgと直鎖状バキュロウイルスベクター0.25μgを混合しHigh Five細胞に加えて27℃で3日間培養し、αPCCを持つ組換えウイルスを作成した。この組換え体ウイルスを昆虫細胞に感染させ、5日間培養後その上清を回収しαPCC蛋白質の発現をウエスタンブロット法でチェックしたがαPCC蛋白質は検出されなかった。今後ベクター、昆虫細胞の培養条件、トランスフェクションの条件等をさらに検討する必要がある。

報告書

(3件)
  • 1998 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1997 実績報告書
  • 研究成果

    (8件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (8件)

  • [文献書誌] Magdalena Ugarte et al: "An overview of mutations in the PCCA and PCCB genes causing propionic acidemia." Human Mutation. in press. (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ohura T et al: "A 84-bp insertion found in a propionic acidemia patient is not a disease causing mutation but a product of cryptic mRNA." Journal of Inherited Metabolic Disease. in press. (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 大浦敏博: "プロピオン酸血症" 別冊日本臨床 領域別症候群シリーズ、先天代謝異常症候群. No.18 (上巻). 276-279 (1998)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Magdalena Ugarte et al: "An overview of mutations in the PCCA and PCCB genes causing propionic acidemia." Human Mutation. (in press). (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ohura T et al: "A 84-bp insertion found in a propionic acidemia patient is not a disease causing mutation but a product of cryptic mRNA." Journal of Inherited Metabolic Disease. (in press). (1999)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Magdalena Ugarte et al: "An overview of mutations in the PCCA andPCCB genes causing propionic acidemia." Human Mutation. in press. (1999)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Ohura T et al: "A 84-bp insertion found in a propionic acidemia patient is not a disease causing mutation but a product of cryptic mRNA." Journal of Inherited Metabolic Disease. in press. (1999)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] 大浦敏博: "プロピオン酸血症" 別冊日本臨床 領域別症候群シリーズ、先天代謝異常症候群. No.18 (上巻). 276-279 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書

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公開日: 1997-04-01   更新日: 2016-04-21  

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