| 研究課題/領域番号 |
09671059
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
内分泌・代謝学
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
置村 康彦 神戸大学, 医学部・附属病院, 助手 (30204100)
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| 研究分担者 |
千原 和夫 神戸大学, 医学部, 教授 (00107955)
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
1998年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1997年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | 成長ホルモン / 成長ホルモン放出ペプチド受容体 / 成長ホルモン放出ホルモン受容体 / 下垂体 / Pit-1 / 遺伝子発現 |
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| 研究概要 |
1、 GHRH受容体遺伝子発現調節機構の解析
(1) GHRH受容体遺伝子5'上流配列デリーション実験により、翻訳開始点より、130から310塩基上流領域が、下垂体特異的発現に重要であることを明らかにした。この領域には成長ホルモン産生細胞に特異的な転写因子であるPit-1のコンセンサス様配列が2箇所存在した。また、2.2Kから1.4Kの領域にはサプレッサーの存在が推測された。
(2) Foot Print法で、上記Pit-1コンセンサス様配列のうち、1箇所にPit-1が結合することを明らかにした。
(3) Mobility Shift法で、上記Pit-1コンセンサス様配列のうち、2箇所にPit-1が結合するが、その結合親和性が大きく異なることを明らかにした。Foot Print法で、1箇所にしかPit-1が結合しなかったのは、親和性の差によると考えられた。
(4) 上記Pit-1結合配列にMutationを加え、GHRH受容体遺伝子のPit-1結合性と、転写促進能が平行することをMobility Shift法、一過性発現実験で確認した。
(5) 各種ホルモンのGHRH受容体遺伝子発現に及ぼす効果を一過性発現実験で検討し、エストロジェン、デキサメサゾンが発現を抑制することを見い出した。さらに、その作用発揮に重要な上流領域を明らかにした。
2、 GHRP受容体遺伝子発現調節機構の解析
(1) ヒトゲノムライブラリーから、GHRP受容体遺伝子5'上流配列をクローニングし、塩基配列の決定を行なった。さらに、5'RACE法で転写開始点を推測した。
(2) 5'上流配列の機能解析を行い、-734から-608の領域が転写活性化に必要であることを明らかにした。上流配列にはPit-1コンセンサス様配列が存在するが、GHRH受容体遺伝発現とは異なりPit-1は明確な転写促進効果を示さなかった。
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