| 研究概要 |
特定の視床下部ペプチドの発現を遺伝子レベルでコントロールすることによって,その生理的な作用を解明する目的で,本研究では生体内電気穿孔法を用いてラットの視床下部神経核に外来性遺伝子が導入可能かどうかについて基礎的な検討を加えた。外来性遺伝子としては,β-galactosidase発現ベクター(pCMVβ)を用いた。方法は,ラットの側脳室内に同プラスミドを注入した後,視床下部弓状核周辺に双極電極を挿入し,遺伝子導入装置を用いてパルス電流を通電した。実験終了後にラットの脳を灌流固定して脳スライス標本を作製し,X-Galの発色反応を観察した。プラスミドの投与は,脳室内投与以外に頸動脈内投与或いは視床下部神経核周辺への局所投与についても試みた。また,電気穿孔法の際の通電条件も色々と変更してみた。X-Galの発色反応は,脳室内脈絡叢,視床下部室傍核,視束上核に認められた。プラスミドの投与方法や通電条件を変えても,これらの部位以外にはプラスミドの取り込みは観察されなかった。電極先端付近の視床下部弓状核の直上にプラスミドを局所注入したが,弓状核にはX-Galの発色反応は観察されなかった。以上の検討から,生体内電気穿孔法による視床下部神経核への外来性遺伝子導入はかなり限定されたものであると考えられる。予想に反して,プラスミドは電極の通電部位である電極先端部から距離的に離れた視床下部神経核に取り込まれ,これらの神経核への遺伝子の導入は,プラスミドを頸動脈内に投与しても全く同じように認められた。このことから,これらの神経核に遠隔的に遺伝子が取り込まれる何らかの機構が存在する可能性が示唆される。遺伝子が導入された神経細胞としては,視床下部室傍核と視束上核に豊富に存在するオキシトシンやバゾプレッシンニューロンの可能性が高い。プラスミドが下垂体後葉系や脳室周囲器官を経て逆行性軸索輸送によってこれらのニューロンに取り込まれる機構を考えている。今後,この点を明らかにし,遺伝子の逆行性軸索輸送を利用した新たな視床下部神経核への遺伝子導入法の確立をめざしたいと考えている。
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