| 研究課題/領域番号 |
09671090
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
血液内科学
|
|---|
| 研究機関 | 北里大学 |
|---|
研究代表者 |
東原 正明 北里大学, 医学部, 教授 (80165084)
|
|---|
| 研究分担者 |
秋山 暢 北里大学, 医学部, 助手 (50286358)
金子 多香子 北里大学, 医学部, 講師 (00286361)
鎌田 貢壽 北里大学, 医学部, 講師 (20146343)
宮崎 浩二 東京大学, 医学部, 医員 (90261966)
須永 真司 東京大学, 医学部, 医員 (70282621)
堀江 良一 東京大学, 医学部, 助手 (80229228)
青木 克已 東京大学, 医学部, 助手 (40291322)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,700千円 (直接経費: 2,700千円)
1998年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1997年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
|
|---|
| キーワード | myosin / myosin I / クローニング / 臍帯血 / 血小板 / シークエンス / cDNA / ライブラリー / mpl / 網血小板 / 血液細胞 / モノクローナル抗体 |
|---|
| 研究概要 |
我々は、ヒト臍帯血、赤芽球系白血病細胞株K562および巨核球系白血病細胞株Meg-01のcDNAライブラリーを作成した。また、ヒト骨髄の巨核球・血小板造血の評価法としてのフロオサイトメトリーによる網血小板の算定法を確立した。また、myosin Iのランダムプライマーを作製し、テンプレートとしてK562白血病細胞株のcDNAをもちいdegenerative PCR法にて増幅した。その結果、4つのcloneを同定した。2つは、unconventional myosinのMyosin VIおよびMyosin IXとsequenceが一致した。あと2つのうち、一つは280bpのもので、これは、K562以外にCMKやMeg-01にも発現していることも、RT-PCRにて確認している。これは、今までの、古典的ミオシンや既報のunconventional myosinとは、異なるもので、新しいミオシンである可能性が高いと思われる。RT-PCR、ノーザンブロッテイングおよびin situ hybridization(ISH)にて検討したところ、この新しいミオシンは、ヒト臓器由来の培養細胞、ヒトの各系統の血液細胞(顆粒球、リンパ球、巨核球/血小板等)すべてにおいて存在が確認された。古典的ミオシンのみならずmyosin Iも生理的に重要な働きをしていることが示唆された。
現在、ヒト臍帯血のcDNAライブラリーの10,000のシークエンスの結果を照らし合わせ、コンピュウター検索を行い、現在までに報告のあるmyosin Iとのホモロジー検索を行い、未知のミオシンを検索している。血液細胞における古典的ミオシンの軽鎖のクローニングも進行中である。また、血小板mRNAからcDNAライブラリーを作成し、血小板のミオシン重鎖は、IIAであって、IIBではないという興味ある結果を得ている。
|
