| 研究課題/領域番号 |
09671173
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
腎臓内科学
|
|---|
| 研究機関 | 自治医科大学 |
|---|
研究代表者 |
大野 修一 自治医科大学, 医学部, 助手 (90285776)
|
|---|
| 研究分担者 |
武藤 重明 自治医科大学, 医学部, 講師 (40190855)
草野 英二 自治医科大学, 医学部, 助教授 (50102249)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
|
| 配分額 *注記 |
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
1998年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1997年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
|
|---|
| キーワード | inner medulla / inner medullary collecting duct / rat epithelial Na^+ channel / low-Na^+ diet / rENaC / Na^+ transport / Inner medulla / Inner medullary collecting duct / Low-Na^+ diet / Rat opithelial Na^+channel / Na^+transport |
|---|
| 研究概要 |
平成9年度は、腎髄質内層(IMCD)におけるラット上皮性ナトリウムチャネル(rENaC)のナトリウム輸送機構としての可能性を探るため、低ナトリウム食の影響をノザンブロット法にて検討した結果、IMCDにおいてαサブユニットのmRNA発現はコントロール食に比べ有意に(2.2倍)増加した。一方、β、γ各サブユニットのmRNA発現量には変化を認めなかった。同様なモデルで、各サブユニットのmRNA発現調節を臓器(肺、大腸、腎臓)ごとに検討したところ臓器間で各サブユニットのmRNA発現に差が認められた(S.Ono et al,Pflugers Arch-Eur J Physiol 434:756-763,1997)ため、各臓器から採取したRNAをアフリカツメガエルの卵母細胞に注入し、機能を^<22>Na uptakeで測定し、臓器間でのメッセージ-機能の相関を検討したが、有意差は得られなかった。
平成10年度は、メッセージ-機能相関の解析を引き続き検討中である。同時に各サブユニットのミュテーションを作り、そのcDNAから作成したcRNAをアフリカツメガエルの卵母細胞に注入し、特異的な抗体を用いチャンネルタンパクが膜にソーティングされる機構を検討するため、2つを同時進行させた。(1)rENaCの各サブユニットのミュテーションの作成。(2)各サブユニットの抗体作成。各サブユニットのペプチド(アミノ酸で15-20個)を合成し、ウサギに免疫し、採取した血清をアフィニティカラムを用いて抗体精製した。各抗体の特性に関しては現在検討中であるが、少なくとも、β,γサブユニットの抗体に関してはimmunohistochemistoryで特定の遠位尿細管が染色されており、その特性をさらに検討中である。抗体のcharacterizationの後、引き続き、プロジェクトを遂行予定である。
|
