| 研究課題/領域番号 |
09671280
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
消化器外科学
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
小林 進 千葉大学, 医学部, 講師 (50234828)
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| 研究分担者 |
白澤 浩 千葉大学, 医学部, 教授 (00216194)
今関 英男 千葉大学, 医学部・附属病院, 助手 (60272308)
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
1999年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
1998年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1997年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | p16 / アデノウイルスベクター / 膵癌 / 遺伝子導入 / 食道癌 / アデノシルスベクター |
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| 研究概要 |
p16^<INK4a>発現アデノウイルスベクターの作製
先ず、東京大学医科研、斎藤泉先生より御供与いただいたアデノウイルス発現ベクターによりp16^<INK4a>発現ベクターを作製した。詳細は以下の如くである。すなわち、開始コドン前約10塩基、終止コドン後約30塩基をつける形で組み込むべきp16^<INK4a> cDNA(0.8kb)をPCR cloningにより、cloningした。これをコスミッドカセット DNAのSwa-1 siteにIn vitro pachage法により組み込み、さらに、これをEco T22Iにて切断された親アデノウイルスと293細胞にco-transfectし、組換えウイルスを分離しp16^<INK4a>発現アデノウイルスベクターを作製した。
p16^<INK4a> mRNA発現の確認(In vitro)
p16^<INK4a>のhomozygous deletionが確認された膵癌培養細胞株 ; MIAPaca-2に対し、上記のp16^<INK4a> 発現アデノウイルスベクターによりp16^<INK4a> 遺伝子導入を行った。これよりmRNA抽出し、Northern,Western Blot Hybridizationを行ったが、実際にp1p16^<INK4a> 遺伝子導入されたMIAPaca-2にp16^<INK4a> のmRNAの高度の発現が見られることを確認した。
p16^<INK4a> 発現による膵癌細胞増殖抑制効果
遺伝子導入によりp16^<INK4a> 発現が確認された膵癌培養細胞株 ; MIAPaca-2とコントロールとしてのアデノウイルス添加されたMIAPaca-2の細胞増殖曲線を比較したがp16^<INK4a> 発現によりMIAPaca-2の細胞増殖は有意に抑制された。
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