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軟骨・非軟骨細胞におけるV/XI型コラーゲンα鎖遺伝子の特異的発現機構の解析

研究課題

研究課題/領域番号 09671497
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 整形外科学
研究機関大分医科大学 (1998)
岡山大学 (1997)

研究代表者

吉岡 秀克  大分医科大学, 医学部, 教授 (00222430)

研究分担者 松尾 哲孝  大分医科大学, 医学部, 助手 (10284788)
調 恒明  大分医科大学, 医学部, 助教授 (50179058)
百田 龍介 (百田 龍輔)  岡山大学, 医学部, 助手 (80263557)
大橋 俊孝  岡山大学, 医学部, 助手 (50194262)
二宮 善文  岡山大学, 医学部, 教授 (70126241)
研究期間 (年度) 1997 – 1998
研究課題ステータス 完了 (1998年度)
配分額 *注記
3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
1998年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1997年度: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
キーワードコラーゲン遺伝子 / 遺伝子発現 / 軟骨細胞 / 細胞外マトリックス / 選択的スプライシング
研究概要

in vivo及びin vitroでα1(XI)鎖コラーゲン遺伝子の転写調節機構を解析する目的で、マウスα1(XI)遺伝子の5'flanking領域のDNA断片を単離した。その結果、ヒトの場合と同様に複数の開始点が存在し、プロモーター領域にはTATAboxやCCAAT boxは認められず、複数のSp1結合部位が存在した。このDNA断片をルシフェラーゼ及びβ-gal遺伝子の上流につないだ。プロモーター領域のDNA断片は-5kbまでのもの(long form)と、-536bPまでのもの(Short form)の二種類を作製した。さらにこれらの四種類のコンストラクトを用いてレポーター遺伝子の下流に第一イントロンの三つのSma断片(上流より3.5kb、3.0kb、7.0kb)をつないだ。これらを用いて、ウシ大動脈平滑筋細胞及びヒト軟骨肉腫培養細胞にトランスフエクションを行いプロモーター活性をみた。その結果、平滑筋細胞においても、軟骨細胞においてもShort promoter(-536bp)の活性が、long Promoter(-5kb)の活性より高かった。又、第一イントロンの三つのSma断片はいづれの細胞においてもShort promoterの活性を抑制させる傾向にあった。
一方、このα1(XI)鎖遺伝子のN末酸性領域の機能を解析する目的で、この領域をコードする各エクソン欠損させたコンストラクトを作製した。このコンストラクトを横紋筋肉腫細胞(A204)、軟骨肉腫細胞(LTC)、腎由来細胞(293)にトランスフェクションし、そのスプライシングパターンをin vitroで調べた。その結果、腎由来細胞ではエクソン6A-7-8をとるパターンが主要なもので、エクソン6Bによりコードされる転写産物は見られなかった。横紋筋肉腫細胞ではエクソン6A-7-8の他にエクソン7-8のパターンも見られた。一方、軟骨肉腫細胞では五種類のパターンが見られた。このin vitroの実験と平行させてin vivoの実験を行うために、エクソン6A、6Bの各々を欠損させたマウスをhomologous recombination法で作製中である。

報告書

(3件)
  • 1998 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1997 実績報告書
  • 研究成果

    (40件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (40件)

  • [文献書誌] Sumiyoshi H.et al: "Ubiquitous expression of the α1(XIX)collagen gene(Col19a1)during mouse embryogenesis becomes restricted to a few tissues in the adult organism." J.Biol.Chem.272・27. 17104-17111 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Mimata C.et al: "Differential distribution and expressions of collagens in the cerebralaneuysmal wall." Acta Neuropathol.94・3. 197-206 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Khaleduzzaman M.et al: "Structure of the human type XIX collagen(COL19A1)gene,which suggestsit has arisen from an ancestor gene of the FACIT family." Genomics. 45・2. 304-312 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yamazaki M.et al: "Spatial and temporal expression of fibril-forming minor collagen genes(type V and XI)during fracture healing." J.Orthop.Res.15・5. 757-764 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kinoshita A.et al: "A transcription activator with restricted tissue distribution regulates cell-specific expression of α1(XI)collagen." J.Biol.Chem.272・50. 31777-31784 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ueki Y.et al: "Topoisomerase I and II consensus sequences in a 17-kb deletion junction of the COL4A5 and COL4A6 genes and immunohistochemical analysis of esophagealleiomyomatosis" Am.J.Hum.Genet.62・2. 253-261 (1998)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Momota R.et al: "Two genes,COL4A3 and COL4A4 coding for the human α3(IV)and α4(IV)collagen chains are arrangedhead-to-head on chromosome2q36." FEBS lett.424・1-2. 11-16 (1998)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Wu Y.-L.et al: "cDNA sequence and expression of the mouse α1(V)coleagen gene(Col5a1)." Biochem.Biophys.Acta.1397・3. 275-284 (1998)

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  • [文献書誌] 吉鷹 輝仁 他: "骨形成不全症" 日本臨床(別冊). 19・2. 510-513 (1998)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 植木 靖好 他: "Ehlers-Danlos症候群" 日本臨床(別冊). 19・2. 514-517 (1998)

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  • [文献書誌] 吉岡 秀克 他: "軟骨異形成症" 日本臨床(別冊). 19・2. 518-521 (1998)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 平川 聡史 他: "先天性表皮水疱症" 日本臨床(別冊). 19・2. 526-530 (1998)

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  • [文献書誌] Kondo J. et al: "Expression of type XVII collagen α1 chain mRNA in the mouse heart." Jpn.Heart J.39・2. 211-220 (1998)

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  • [文献書誌] 吉岡 秀克他: "関節マーカー" 岩田 久 他, 355 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sumiyoshi H.et al: "Ubiquitous expression of the alpha1 (XIX) collagen gene (Col19a1) during mouse embryogenesis becomes restricted to afew tissues in the adult organism." J.Biol.Chem.272-27. 17104-17111 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Mimata C.et al: "Differential distribution and expressions of collagens in the cerebral aneuysmal wall." Acta Neuropathol.94-3. 197-206 (1997)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Khaleduzzaman M.et al: "Structure of the human type XIX collagen (COL19A1) gene, which suggests it has arisen from an ancestor gene of the FACIT family." Genomics. 45-2. 304-312 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yamazaki M.et al: "Spatial and temporal expression of fibril-forming minor collagen genes (type V and XI) during fracture healing." J.Orthop.Res.15-5. 757-764 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kinoshita A.et al: "A transcription activator with restricted tissue distribution regulates cell-specific expression of alpha1 (XI) collagen." J.Biol.Chem.272-50. 31777-31784 (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ueki Y.et al: "Topoisomerase I and II consensus sequences in a 17-kb deletion junction of the COL4A5 and COL4A6 genes and immunohistochemical analysis of esophagealleiomyomatosis associated with Alport syndrome." Am.J.Hum.Genet.62-2. 253-261 (1998)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Momota R.et al: "Two genes, COL4A3 and COL4A4 coding for the human alpha3 (IV) and alpha4 (IV) collagen chains are arranged head-to-head on chromosome 2q36." FEBS lett.424-1/2. 11-16 (1998)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Wu Y.-L.et al: "cDNA sequence and expression of the mouse alpha1 (V) collagen gene (Col5a1)." Biochem.Biophys.Acta.1397-3. 275-284 (1998)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yoshitaka T.et al: "steogenesis Imperfecta" Ryoikibetsu Shokogun Shirizu. 19-Pt2. 510-513 (1998)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ueki Y.et al: "Ehlers-Danlossyndrome" Ryoikibetsu Shokogun Shirizu. 19-Pt2. 514-517 (1998)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yoshioka H.et al: "Chondrodysplasia" Ryoikibetsu Shokogun Shirizu. 19-Pt2. 518-521 (1998)

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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hirakawa S.et al: "Epidermolysisbullosa hereditaria" Ryoikibetsu Shokogun Shirizu. 19-Pt2. 526-530 (1998)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kondo J.et al: "Expression of type XVII collagen alpha1 Chain mRNA in the mouse heart." Jpn.heart J.39-2. 211-220 (1998)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yoshioka H.et al: Markers in Cartilage. eds by Iwata H et al, 3-16 (1997)

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    • 関連する報告書
      1998 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yasuyoshi Ueki et al.: "Topoisomerase I and II consensus sequences in a 17-kb deletion junction of the COL4A5 and COL4A6 genes and immunohistochemical analysis." American Journal of Human Genetics. 62・2. 253-261 (1998)

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      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Ryusuke Momota et al: "Two genes COL4A3 and COL4A4 coding for the human α3 (IV) and α4 (IV) collagen chains are arranged head-to-head on chromosome 2q36" FEBS letters. 424・1-2. 11-16 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Yan-Ling Wu et al: "cDNA sequence and expression of the mouse α1 (V) collagen gene (Col5a1)" Biochemica et Biophysica Acta. 1397・3. 275-284 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] 吉鷹 輝仁 他: "骨形成不全症" 日本臨床(別冊). 19・2. 510-513 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] 植木 靖好 他: "Ehlers-Danlos症候群" 日本臨床(別冊). 19・2. 514-517 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] 吉岡 秀克 他: "軟骨異形成症" 日本臨床(別冊). 19・2. 518-521 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] 平川 聡史 他: "先天性表皮水泡症" 日本臨床(別冊). 19・2. 526-530 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Jun Kondo et al: "Expression of type XVII collagen α1 chain mRNA in the mouse heart" Japanese heart Jaurnal. 39・2. 211-220 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Hideaki Sumiyoshi et al: "Ubiguitous expression of the α1(XIX) collagen gene (Coll9a1) during mouse embryogenesis becomes restricted to a four tissues in the adult organism" The Journal of Biologycal Chemistry. 272巻・27号. 17104-17111 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Chikara Mimata et al: "Differential distribution and expression of collagens in the cerebral aneurysmal wall" Acta Neuropathol. 94巻. 197-206 (1997)

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      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Mohammed Khaleduzzamanctal: "Structure of the human type XIX collagen (Coll9a1) gene,which suggests it has arisen from an ancestor gene of the FACIT family" Genomics. 45巻. 304-312 (1997)

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      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Akihiro Kinoshita et al: "A transcription activator with restricted tissue diseribution regulates cell-specific expression of α1 (XI) collagen" The Journal of Biologycal Chemistry. 272巻・50号. 31777-31784 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書

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公開日: 1997-04-01   更新日: 2016-04-21  

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