| 研究概要 |
本研究は,細胞とコラーゲンとの相互作用を仲介する蛋白としてのRGD-CAPの軟骨細胞増殖分化における役割探究を目的としており,これまでに以下のことを明らかにした。
(1) ニワトリ胸骨軟骨cDNAライブラリーからRGD-CAPの完全長cDNAを単離し,全塩基配列を決定した。ニワトリRGD-CAPのcDNAは680個のアミノ酸に翻訳され,4つの繰り返し構造を持ち,またC端近傍にはインテグリン認識部位であるRGD配列が存在した。
(2) recombinantRGD-CAP蛋白を大腸菌で発現させ、それに対する抗血清を用いたWestern blot法によってニワトリ胸骨軟骨培養細胞について調べた結果、Conditioned Medium中でのRGD-CAP量はTGF-β添加により経時的に増加し,先にブタ軟骨細胞で観察されたTGF-βによるmRNAの増加と一致した。ニワトリ胚の頚椎において軟骨が分化する過程でRGD-CAPは基質形成層から肥大層にかけて多く分布していた。
(3) I型、II型,III型,V型コラーゲンを共存下でrecombinant RGD-CAPのウサギ関節軟骨細胞の伸展に対する影響と初期接着に対する影響を検討したところ,細胞の初期接着にはRGD-CAPとコラーゲンはそれぞれ独立して作用するが、細胞伸展には両者が協調的に作用して細胞外基質の高次構造を改変し、効果を発揮していると考えられた。
(4) これらの作用はEDTAで阻害され、2価の金属イオンにより亢進し,RGD-CAPの細胞接着及び細胞伸展促進作用はインテグリンを介すると推察された。
(5) 各種,抗インテグリン抗体を用いた実験により、RGD-CAPは細胞と直接結合し,細胞膜上のレセプターとしてα1,α5,β1インテグリンを介することがすることが判明した。
(6) 異なる数のる繰り返し構造を持つrecombinant RGD-CAPタンパク断片を用いることにより、4個の繰り返し構造のうち特に2個の繰り返し構造が重要であることが判明した。
|
