| 研究課題/領域番号 |
09672315
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
人類遺伝学
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| 研究機関 | 帝京大学 |
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研究代表者 |
高野 貴子 帝京大学, 医学部, 助教授 (50236246)
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| 研究分担者 |
山内 泰子 帝京大学, 医学部, 助手 (40246038)
高野 薫 筑波大学, 物質工学系, 助教授 (60133005)
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
1998年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1997年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
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| キーワード | 高圧力 / 免疫系細胞 / 細胞死 / アポトーシス / リンパ芽球 / Ramos / HL-60 |
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| 研究概要 |
ヒト免疫系培養細胞を用いて、高圧力による細胞死の解析を行った。株化Bリンパ芽球(EB3)、Brukittリンパ腫細胞株(Ramos)、前骨髄球性白血病細胞株(HL-60)を37℃で30分間一定の高圧力で加圧し、細胞死の圧力依存性と圧力誘起アポトーシスを調べた。生細胞率は圧力増加に従ってシグモイダルに減少し、EB3試料では生細胞率が50%になる圧力P_<1/2>は約170MPaであり、Ramos、HL-60のP_<1/2>はそれぞれ約130MPa、150-160MPaで、EB3に比べて低い圧力で細胞死が起きた。100MPa加圧したEB3とRamosでは除圧後ネクローシス細胞が漸増し、8時間後よりアポトーシス細胞が出現した。p53が欠損しているHL-60では除圧後からアポトーシスが優位な細胞死で、アポトーシスの発現機序が異なっていた。EB3とHL-60を用いて加圧前と加圧後のアポトーシス関連蛋白および細胞骨格関連蛋白のウエスタンブロット解析を行った。EB3では100MPa加圧後p53の発現増強がみられた。Bcl-2とBaxも10時間後に発現増強が認められ、Baxの優位によりアポトーシスが進行したと説明できる。さらにCaspase-3とα-tubulinの発現減少がみられた。γ-tubulinとβ-actinの発現量は変わらなかった。α-およびγ-tubulin抗体を用いた免疫組織染色では100MPa加圧後微小管構造が崩壊し、中心体が検出できなくなった。HL-60ではα-、γ-tubulin、β-actinの発現量は100MPa加圧で変わらなかったが、除圧直後にBcl-2とBaxの発現増強が認められた。Caspase-3の除圧2時間後の発現減少を認め、活性化されたp17を検出した。同時にphospho p38 MAPKの発現増強が見られた。EB3のようにp53を介する系とHL-60のようにp53を介さない系があり、後者はMAPK cascadeの関与が示唆された。どちらもBcl-2/BaxとCaspase cascadeの共通経路を経てアポトーシスに至ると考えられる。
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