| 研究概要 |
低分子化合物(ハプテン)の微量分析法として競合型イムノアッセイが汎用されているが,原理上,その測定感度には自ずと限界がある.しかし,抗ハプテン抗体とこれに対応する抗イディオタイプ抗体(抗Id抗体)を組み合わせて用いることで,従来不可能とされてきたハプテンの高感度な非競合型イムノアッセイ法を確立しうるものと期待される.そこで,モデルハプテンとして胆汁酸代謝物のひとつであるウルソデオキシコール酸7-N-アセチルグルコサミニド(UDCA 7-NAG)並びに11-デオキシコルチゾール(11-DC)を取り上げてモノクローナル抗Id抗体の調製を試みた.先に調製した抗UDCA 7-NAG抗体,Ab,#8,又は抗11-DC抗体,CET-M8をヘモシアニンとの結合体としてBALB/c又はA/Jマウスに反復投与し,その脾細胞をNS-1ミエローマ細胞と融合させた.その結果,いずれのハプテンについても,対応する第一抗体のフレームワーク領域を認識するαタイプ抗Id抗体及びパラトープを認識するβタイプ抗Id抗体を調製することに成功した.さらに,UDCA 7-NAGについては,得られたαタイプ抗Id抗体のAb_2-19とβタイプ抗Id抗体のAb_2-45を組み合わせて,非競合型イムノアッセイを試みた.すなわち,Ab_1#8のF(ab')_2フラグメントを吸着させたマイクロタイタープレートにUDCA7-NAG,Ab_2-45,及びビオチン標識したAb_2-19を同時に加えて室温で8時間インキュベーションした.ついで固相上のビオチンを検出するためにペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを添加して更に1時間インキュベーションし,プレート上に結合した酵素の活性を吸光光度法により測定した.本アッセイ系で用量作用曲線を作成したところ,測定可能範囲はおよそ0.2〜500pgと極めて広く,検出限界(0点における酵素活性の標準偏差の2倍に相当するハプテン量)は130fg(220amol)で,同一の抗ハプテン抗体(Ab_1#8)を用いた競合型イムノアッセイに比べて約10倍高感度であった.現在,各抗体の添加量や添加の順序など,各種パラメーターの至適条件について検討を進めているが,さらに高感度化が可能と期待される.
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