| 研究課題/領域番号 |
09680044
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
家政学
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| 研究機関 | 名古屋女子大学 |
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研究代表者 |
大羽 和子 名古屋女子大学, 家政学部, 教授 (80023480)
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| 研究分担者 |
松岡 信 名古屋大学, 生物分子応答研究センター, 教授 (00270992)
山本 淳子 名古屋女子大学, 家政学部, 助手
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
1999年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1998年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1997年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | アスコルビン酸 / アスコルビン酸オキシダーゼ / L-ガラクトノラクトンデヒドロゲナーゼ / L-グロノラクトンオキシダーゼ / 形質転換植物 / サツマイモ / ジャガイモ / トマト / センスコンストラクト / アンチセンスコンストラクト / cDMAクローニング / ゲノミックサザン / L-ガラクトノラクトンデヒドロゲナーテ / アミノ酸シークエンス |
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| 研究概要 |
1.グロノラクトンオキシダーゼ(GLO)遺伝子を導入した形質転換体の作出と解析
(1)ジャガイモ形質転換体の作出と解析:形質転換個体でGLO遺伝子と35Sプロモーター遺伝子の存在が確認できた。形質転換体のうち2個体で総ビタミンC(VC)含量が原品種よりも高く、GLO活性が存在した。
(2)トマト形質転換体の作出と解析:カナマイシン入りの培地で発芽したp35S-GLO形質転換体のうち、60%の個体にGLO遺伝子の存在が確認できた。これらの個体のうち、VC含量が原品種(秋玉)よりも高い個体は11個体であったが、原品種のVC量の2倍以上を含有する個体は4個体であった。
2.アスコルビン酸オキシダーゼ(AAO)遺伝子を導入した形質転換体の作出と解析
(1)AAOの遺伝子をセンス方向に導入した(p35S-SeAAO)タバコ形質転換体(BAS群)は35個体あり、すべての個体で原品種よりVC量が少なく、そのうちAAO蛋白質量が多かったのは19個体であった。
(2)アンチセンス方向に導入した(p35S-AnAAO)形質転換体(BAR群)は17個体であり、BAR群では3個体で原品種よりVC量が多かったが、AAO蛋白質量が少なかったのはそのうち1個体であった。BAR群のVC量の平均値は、BAS群の平均値の2.7倍であった。
(3)AAO-mRNA量は、BAS群の12個体中9個体で原品種より多く、BAR群の7個体中すべての個体で少なくなっていた。
以上の結果から、GLOやAAO遺伝子の発現量がVC量を調節していることが示唆された。
3.サツマイモL-ガラクトノラクトンデヒドロゲナーゼ(GLDHase)のcDNAのクローニング
精製したサツマイモGLDHaseをV8プロテアーゼで切断した4つのポリペプチドのN-末端アミノ酸配列を決め、それから推測されるヌクレオチド鎖をプライマーにして、PCRでGLDHase遺伝子のcDNA断片を増幅させた。得られたcDNAクローンは、581個のアミノ酸、分子量66kDaをコードしていた。カリフラワーのGLDHaseのcDNAと77%の相同性があり、ラットのグロノラクトンオキシダーゼのcDNAとは22%の相同が認められた。ゲノミックサザン分析からサツマイモのGLDHase遺伝子はシングルコピーとして存在することが示唆された。
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