| 研究課題/領域番号 |
09680704
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
細胞生物学
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| 研究機関 | 関西医科大学 |
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研究代表者 |
柾木 龍一 関西医科大学, 医学部, 講師 (70140283)
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| 研究分担者 |
山本 章嗣 関西医科大学, 医学部, 講師 (30174775)
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
2,800千円 (直接経費: 2,800千円)
1998年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1997年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | HPC-1 / syntaxin 1A / C-末端アンカー型膜蛋白質 / 小胞体挿入 / 細胞内移行 / msALDH / 小胞体膜挿入 / GFP / COS細胞 / 細胞膜 |
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| 研究概要 |
本研究ではC-末端アンカー型膜蛋白質であるHPC-1/syntaxin 1A(HPC-1)の局在化機構をCOS細胞発現系を用いて調べ、以下の結果を得た。
1. 野生型HPC-1とC-末端疎水性領域の23アミノ酸残基を欠失させたHPC-1Δ266-288(Δ266-288)をCOS細胞に発現させた。細胞内局在を細胞分画法で調べたところ、野生型は膜画分にΔ266-288は可溶性画分に検出された。このことから、HPC-1のC-末端疎水性領域が膜挿入に関与することが確認された。また間接蛍光抗体法では、野生型およびΔ266-288はそれぞれゴルジ領域・細胞膜と細胞質に局在することが明らかになった。
2. HPC-1の膜トポロジーと細胞内輸送経路を調べるために、ウシ・オプシンの糖鎖付加配列を含む21アミノ酸残基をC-末端に融合したHPC-1/OP3を作製した。COS細胞に発現したキメラにはEndo H感受性の糖鎖が付加された。このことから、HPC-1の疎水性領域は膜を貫通していることが明らかになった。また、間接蛍光抗体法での結果と照らし合わせると、HPC-1はまず小胞体に挿入された後、分泌経路を経て細胞膜に到達することが示唆された。
3. HPC-1の小胞体膜移行配列を調べるため、HPC-1のC-末端33または24アミノ酸残基を大腸菌のマルトース結合蛋白質(MBP)のC-末端に融合したキメラを作製した。COS細胞に発現したMBPが細胞質に局在するのに対し、二種類のキメラは野生型HPC-1と同じくゴルジ領域と細胞膜に局在した。さらにオプシンの糖鎖付加配列を融合したMBP/HPC-1キメラもEndo H感受性の糖鎖が付加された。この結果は、小胞体膜移行および組み込みにはHPC-1のC-末端24アミノ酸残基で充分であることを示している。
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