| 研究課題/領域番号 |
09770073
|
|---|
| 研究種目 |
奨励研究(A)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
医化学一般
|
|---|
| 研究機関 | 京都大学 |
|---|
研究代表者 |
縣 保年 京都大学, 遺伝子実験施設, 助手 (60263141)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
|
| 配分額 *注記 |
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1998年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1997年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
|
|---|
| キーワード | 転写因子 / 転写抑制 / 転写調節 / Kruppel / Znフィンガー / Kruppel associated box(KRAB) / KAP-1(KRAB Associated Protein-1) / co-repressor / Leucin rich repeat(LeR) / KAP-1 |
|---|
| 研究概要 |
本研究では、発生や細胞分化に重要な役割を果たしているKruppelタイプZnフィンガー(Kruppel-ZF)遺伝子を系統的に単離し、その転写調節機能を解析することを目的とし、まずPCRに基づく効率のよいKruppel-ZF遺伝子単離法を用いて多数の新規遺伝子を単離した。そのうち2つの新しいKuppel-ZF蛋白(Mszf42/49のちにMRAZ1/2と改名)が、MRAB(Kuppel Associsted Box)と呼ばれる特徴的なドメインを持ち、GAL4DNA結合ドメインと融合させると、MRABドメインとGAL4結合配列に依存して転写を抑制することを見い出した。さらにMRAZ1/2のMRABドメインと、KAP-1(MRAB Associated Protein-1)と呼ばれる蛋白が特異的に結合するとともに、KAP-1自身に強い転写抑制活性があることを明らかにした。そこでKAP-1のKRABとの結合ドメインと転写抑制ドメインを詳細に決定したのちに、KRAZ1/2,とKAP-1が細胞内で機能的に結合しうるかmarmma1ian two-hybrid assayにより検討した。すなわちKAP-1とVP16転写活性化ドメインの融合蛋白を、GAL4KRAZl/2と共発現させると、転写抑制ドメインを欠失したKAP-1変異体では、GAL4-KRAZ1/2によって抑制されていた転写が、逆に顕著に活性化されたのに対して、全長のKAP-1では転写抑制ドメインが優勢に働き、転写は抑制された。これらの結果から、KRAZ1/2,とKAP-1が実際に細胞内で相互炸用し、さらにはKAP-1が、MRAB-ZF蛋白との複合体において機能的なco-repressorとして転写を抑制することを初めて証明した。
|
