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動物組織リゾホスホリパーゼアイソザイムのcDNAクローニングと分化による調節

研究課題

研究課題/領域番号 09770094
研究種目

奨励研究(A)

配分区分補助金
研究分野 病体医化学
研究機関群馬大学

研究代表者

杉本 博之  群馬大学, 医学部, 講師 (00235897)

研究期間 (年度) 1997 – 1998
研究課題ステータス 完了 (1998年度)
配分額 *注記
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1998年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1997年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
キーワードリゾホスホリパーゼ / リゾホスファチジルコリン / アンキリン リピート / リゾホスファケジルコリン / アンキリンリピート
研究概要

我々は、ラット肝臓から種々のカラムを使用し、低分子型である25KのリゾホスホリパーゼIとII、および高分子型である60Kのリゾホスホリパーゼ/トランスアシラーゼ(リゾホスホリパーゼIII)を精製し、均一な標品を得た。さらに抗体を作成し、リゾホスホリパーゼI、IIおよびIIIのcDNAを得た。リゾホスホリパーゼIとIIは65%の相同性を示した。ともにセリンエステラーゼに特徴的なGXSXG配列を含んでいた。今回、リゾホスホリパーゼIIのアミノ酸変異酵素を作成しその酵素活性を測定した。Gly-120、Ser-122およびGly-124とも酵素活性に重要であり、活性中心はGXSXGであることが推測された。また、Ser-122、ASp-176およびHis-210によりcatalytic triadが形成されることも推測された。高分子型である60Kのリゾホスホリパーゼ/トランスアシラーゼは1位にアシル基を有するリゾホスファチジルコリンのみでなく、2位にアシル基を有するリゾホスファチジルコリンも基質とし、2位のアラキドン酸を1位にアシル基転移し、1、2-ジアラキドノイルホスファチジルコリンを生成することが確認された。ホスファチジルコリンの1位のアラキドン酸はオピオイド受容体のリガンドであるアナンダミド作成に重要である事が報告されており、本酵素の重要性が再認識されるようみなってきた。また、高分子型である60Kのリゾホスホリパーゼ/トランスアシラーゼのN末端側は酵素活性を有すると考えられ、大腸菌のアスパラギナーゼIと相同性を示し、次いてロイシンジパ-よう配列、そしてC末端側には2つのankyrin repeat構造を有していた。
このことは60Kのリゾホスホリパーゼ/トランスアシラーゼが結合蛋白質を有しているとを示唆するが、結合蛋白質の精製が困難であったため、現在YeastのYwo-hybrid systemを用いてスクリーニング中である。

報告書

(2件)
  • 1998 実績報告書
  • 1997 実績報告書
  • 研究成果

    (6件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (6件)

  • [文献書誌] Sugimoto H,Yamashita S,Odani S: "Cloning and expression of cDNA encoding rat liver 60-kDa lysophospholipase containing an asparaginase----" The Journal of Biological Chemistry. 273. 12536-12542 (1998)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Toyoda T,Sugimoto H,Yamashita S.: "Sequence,expression in Escherichia coli and characterization of lysophospholipase II." Biochimica et Biophysica Acta. (in press). (1999)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] Hiroyuki Sugimoto, Shoji Odani and Satoshi Yamashita: "Cloning and expression of cDNA encoding rat liver 60-kDa lysophospholipase containing asparaginase-like region and ankyrin repeat." Jounal of Biological Chemistry. 273(in press). (1998)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Hiroyuki Sugimoto, Hiroaki Hayashi and Satoshi Yamashita: "Purification,cDNA cloning,and regulation of lysophospholipase from rat liver." Jounal of Biological Chemistry. 271. 7705-7711 (1996)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Hiroaki Sunaga, Hiroyuki Sugimoto and Satoshi Yamashita: "Purification and properties of lysophospholipase isoenzymes from pig gastric mucosa." Biochemical Journal. 308. 551-557 (1995)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] Hiroyuki Suimoto and Satoshi Yamashita: "Purification,characterization,and inhibition by phosphatidic acid of lysophospholipase transacylase from rat liver" Jounal of Biological Chemistry. 269. 6252-6258 (1994)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書

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公開日: 1997-04-01   更新日: 2016-04-21  

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