| 研究概要 |
1) uroguanylin遺伝子の構造決定とプロモーター領域の機能解析
平成9年度にクローニングに成功したヒトおよびマウスuroguanylin遺伝子は、いづれも約2.5kbの範囲で存在し、guanylin遺伝子と同様に3つのexonから構成されており、mature peptide部分はexon 3に含まれる共通の構造をしていた。得られたプロモーター領域DNAを用いて、ルシフェラーゼ遺伝子をレポーター遺伝子としたベクターを構築した。uroguanylin遺伝子の発現を認める培養腸上皮細胞にトランスフェクトし、uroguanylin遺伝子のプロモーター領域の機能解析を進めている。
2) uroguanylin遺伝子破壊マウスによるuroguanylinの機能解析前年度に単離したマウスuroguanylin遺伝子ゲノム断片を用いて、マウスuroguanylin遺伝子のtargeting vectorを構築し、電気穿孔法にてES細胞に遺伝子導入を行い、薬剤選別にて組換え体を得た。
サザン解析にて相同組換え体を同定後、キメラマウスを作製し、最終的にuroguanyIin遺伝子破壊マウスによるuroguanylinの機能解析を行う。
3) 新規guanylin familyペプチドの同定
クローニングに成功したラットuroguanylin cDNAを用いて遺伝子発現を解析した結果、uroguanylin遺伝子は主として腸管に発現していたが、guanylin遺伝子の発現を認めない胃、腎臓,膵臓,肺においてもuroguanylin遺伝子は発現していた。ラット小腸および腎臓のcDNAライブラリーをlow stringencyの条件でスクリーニングし、guanylin familyに属する第三のアイソペプチドをcodeする遺伝子の同定を進めている。
4) 循環調節異常、消化器系腫瘍性疾患におけるuroguanylin遺伝子およびその近傍領域の多型解析
ヒトuroguanylinとguanylin遺伝子はFISH解析にて第1染色体短腕上に極めて近接して存在(1p34-p35および1p33-p34)し、その近傍には、高い変異性を示す座位が存在することを確認した。今後、各種循環調節異常、消化器系腫瘍性疾患者についてuroguanylinに関連する遺伝子の多型性を解析し、遺伝的素因との関連性を明らかにする。
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