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好中球走化性蛋白質LECT2のレセプターのクローニング

研究課題

研究課題/領域番号 09770163
研究種目

奨励研究(A)

配分区分補助金
研究分野 実験病理学
研究機関国立感染症研究所

研究代表者

山越 智  感染研, 研究員 (00212283)

研究期間 (年度) 1997 – 1998
研究課題ステータス 完了 (1998年度)
配分額 *注記
1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1998年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1997年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
キーワード好中球走化性蛋白質 / レセプター / LECT2 / クローニング
研究概要

ヒトLECT2レセプターの検出系の確立及びLECT2レセプターを発現する培養細胞のスクリーニングを目的として、CHO細胞由来のヒト組み換え体LECT2(rLECT2)をペルオキシダーゼ法により常法にしたがって125Iラベルし、各種細胞に対して結合実験を行った。用いた細胞は、接着系の培養細胞としてHeLa細胞,HepG2,HuH-6を初めとする肝癌細胞6種、及びMC3T3-E1細胞、血球系癌細胞としてHL-60,U937,K562など15種類の細胞をPHA(5μg/ml),LPS(10μg/ml),PMA(1ng/ml)で24時間処理しBinding assayに供した。接着系細胞でのassayは、10cmのdish当たり1×10^6まいた細胞に対して1,2,4nMの標識LECT2を処理し、4℃で3時間インキュベーション後、細胞と上清の放射活性を測定した。また、特異的結合については標識LECT2添加1時間後に非標識LECT2を8μM加え、さらに2時間インキュベーションした。浮遊系細胞では、1サンプル当たり5×10^6細胞に対しtest tubeを使い同様の実験を行った。スクリーニングの結果、ヒト血球系細胞HuT-78,K562,マウス骨芽球系細胞MC-3T3-E1が候補として得られた。しかし、cDNAのクローニングの為のLECT2レセプターmRNAのsourceとしては発現レベルが低いことが予想されたため、現在、さらに別の細胞のスクリーニング、高感度Binding assay系の検討を行っている。

報告書

(1件)
  • 1997 実績報告書
  • 研究成果

    (6件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (6件)

  • [文献書誌] 山越 智: "Expression of a neutrophil caemotactic protein LECT2 in human hepatocytes revealed by immunochemical studies using polyclonal and ・・・" Biochem Biophis.Res.Commun.237. 116-120 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 大谷 功: "Myeloperoxidase (MPO) Fragments reacting with a serum of patient with MPO-ANCA positive Glomerulernephritis." Journal of Infection and Chemotherapy. (発表予定).

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 山越 智: "Molecular cloning of human and bovine LECT2 having a neutrophil chemotactic activity and its specific expression" Biochim.Biophys.Acta. (発表予定).

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 富沢一夫: "A panel set epitope analysis of myeloperoxidase (MPO) -spewfic antimutrophil cytoplasmic antibody MPO-ANCA using・・・・" J.Clinic.Immun.(発表予定).

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 伊藤三恵: "Proparation of rechombinat-histidine-tagged human LECT2,a chemotactic protein to neutrophil in Escherichia cooli" Cytotechnology. (発表予定).

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書
  • [文献書誌] 山越 智: "Molecular cloning,structural characterization and chremosomal mapping of human LECT2 gene." Genomics. (発表予定).

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書

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公開日: 1997-04-01   更新日: 2016-04-21  

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