p53C末端発現レトロウイルスによるLi-Fraumeni症候群の遺伝子治療

• 研究課題/領域番号: 09770570
• 研究種目: 奨励研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 小児科学
• 研究機関: 山口大学
• 研究代表者: 松原 知代 山口大学, 医学部・附属病院, 講師 (10245722)
• 研究期間 (年度): 1997 – 1998
• 研究課題ステータス: 完了 (1998年度)
• 配分額: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円); 1998年度: 700千円 (直接経費: 700千円); 1997年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
• キーワード: 遺伝子治療 / Li-Fraumeni症候群 / p53 / Retrovirus vector / Pseudotyped / retrovirus vector

研究概要

1. p53C末端を発現するPseudotyped retrovirus vectorの作製
p53C末端を発現するvectorであるpLXSNp53C(LTR-p53C-SV40-Neo-p53C-LTR)を、pLXSN(LTR-SV40-Neo-LTR)とpCMVp53(CMV-promotor p53C terminal)からサブクローニングした。
2. Pseudotyped retrovirusの作製
pLXSNp53Cを293GP細胞(ATCCC CRL9078,Molony mouse leukemia virusのgag、polのみをアデノウイルスでtransformさせた細胞)にリポゾームを用いてtransfectionさせた。G418で感染細胞を選別してstable cell lineの作製を試みた.その細胞にpCMV-VSV-G(VSV-Gの膜蛋白発現遺伝子)をリポゾームで一過性にtransfectionさせ、48時間および72時間後の培養上清中のウイルスを採取した.
3. 感染実験
作製したウイルスの抗体価の測定を試みた。通常ウイルスの抗体価の測定には、産生されたウイルスを208F細胞に感染させ、G418で感染細胞を選別して、約2週間後に得られたコロニー数によって算定する.しかし、Pseudtyped pLXSNp53Cのウイルスを感染させてもコロニーが産生されなかった。このウイルスは細胞にとってトキシックであった。よって、Pseudotyped pLXSNp53Cのウイルスは作製できず、ヒトリンパ球由来細胞株(EBVでtransformした正常およびLi-Fraumeni症候群患者のリンパ球と、ヒト白血病細胞株)への感染実験がなしえなかった。より良いベクターの開発が必要である。