HLA-Cw0102拘束性癌退縮抗原遺伝子クローニングと臨床応用

• 研究課題/領域番号: 09770983
• 研究種目: 奨励研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 消化器外科学
• 研究機関: 久留米大学
• 研究代表者: 今井 康久 久留米大学, 医学部, 助手 (90268847)
• 研究期間 (年度): 1997 – 1998
• 研究課題ステータス: 完了 (1998年度)
• 配分額: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円); 1998年度: 800千円 (直接経費: 800千円); 1997年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
• キーワード: 食道癌 / HLA-Cw0102 / CTL / 癌退縮抗原 / 扁平上皮癌 / 遺伝子クローニング / HLA拘束性

研究概要

食道癌患者(HLA-Cw0102陽性)の転移リンパ節より得たリンパ球をIL2下で長期培養し、これらT細胞の各種癌細胞株に対する細胞傷害能をIFN7γ,^<51>遊離法で検討したところ、HLA-Cw0102拘束性C比株を樹立することができた。そこで、このCTLにより認識されるHLA-Cw0102陽性食道癌細胞株TEのcDNAライブラリーを製作し、HLA-Cw0102拘束性癌退縮抗原遺伝子の解析を以下のような方法で行った。HLA-Cw0102のプラスミドとTE8のcDNAライブラリーをCOS7(サル腎細胞株)にダブルトランススフェクトし、この遺伝子導入COS7とHLA-Cw0102拘束性癌特異的キラー細胞とを混合培養した。その上清のIFN-γ産生量をELISAにて測定することで目的の遺伝子を2種類同定することができた。これらの遺伝子をジデオキシン法にて塩基配列を解析し、全塩基配列を決定したところ、それぞれubiquitinとhiston H1 genomic DNAと同一のものであった。現在、これらの遺伝子のアミノ酸配列を決定し、それに基いてペプチドを製作を行っている。それらを自家Bcell由来のEBV-transfered Bcell lineへ結合させ、樹立した自家の癌特異的キラー細胞と反応させ、IFN-γ,^<51>Cr遊離法で測定する。その結果より癌抗原ペプチドを同定する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Toh,U.,Inai,Y.,et al: "HLA-class-I-restricted and tumor-specific cytotoxic T lymphocytes from metastatic lymphocytes from metastatic lymphonodes of esophageal cancers." Cell.Immunol.177. 137-143 (1997)
• [文献書誌] Shichijo,S.,Inai,Y.,et al: "A Gene encoding antigenic peptides of human sguamous cell carcinoma recognized by cytotoxic T lymphocytes." J.Exp.Med.187. 277-288 (1998)
• [文献書誌] Gotoh,M.,Inai,Y.,et al: "Seguence Analysis of genes encoding rodent homologues of the human tumor-rejection antigen SART-1." JJCR. 89. 849-855 (1998)
• [文献書誌] Kawamoto,M.,Inai,Y.,et al: "Expression of the SART-1 tumor-rejection antigen in breast cancer." Int.J.Cancer. 80. 64-67 (1999)
• [文献書誌] Shichijo S, Imai Y et al.: "A gene encoding antigenic peptides of human squamous cell carcinoma recognized by cytotoxic T lymphocytes." J.Exp.Med.187(3). 277-288 (1998)
• [文献書誌] Toh U, Imai Y et al.: "HLA class I-restricted and tumor-specific cytotoxic T lymphocytes from metastatic lymph nodes of esophageal cancers." Cellular Immunology. 177. 137-143 (1997)
• [文献書誌] Miyajima J, Imai Y et al.: "Higher susceptibility of erythropoietin-producing renal cell carcinomas to lysis by lymphokine-activated killer cells." J.Immunotherapy. 19(6). 399-404 (1997)