| 研究概要 |
(方法及び結果)
対象;ヒト神経芽腫細胞株(NB9,IMR32)及びヒト悪性神経膠芽腫細胞株(T98G,A172)放射線照射による細胞障害の定量;MTTassayによる検討ではT98G,A172においてNB9,IMR32に比し顕著な放射線抵抗性を示した。T98G,A172両者間では有意にT98Gにおいて放射線抵抗性を示した。
放射線による抗酸化酵素の誘導とその定量;GSHの細胞内濃度は定常状態で放射線抵抗性と正比例し、T98GではNB9に比し実に14倍の濃度であった。照射により細胞内GSH濃度、GSH合成の律速酵素であるγ-GCSは上昇し、その上昇に要する線量はNB9では1Gyであるのに対しT98Gでは29Gy以上を要した。これにより細胞内GSHがγ-GCSのレドックス制御に関わっていることが示唆された。
γ-GCS遺伝子のプロモーター解析;EMSAにてγ-GCS heavy subnit上流に存在するNF-κBのDNA binding activityを検討した結果、T98Gにおいて20Gy以上の高線量域での上昇をみた。更に細胞内GSHを低下させる前処置にて1Gy程度の低線量にて上昇することを確認した。γ-GCS hevy sobunit上流のluciferase assayではNF-κB bunding siteのdeletion,mutationによりプロモーター活性は失われた。以上により放射線によるNF-κBを介したγ-GCS誘導、更にNF-κBのDNAbindingは細胞内GSHにより負の制御を受けていることが示唆された。
(まとめ)
悪性神経膠芽腫細胞株において、細胞内GSH(グルタチオン)濃度および照射後のγ-GCS(グルタチオン合成の律速酵素)の遺伝子誘導ならびに活性上昇を介したGSH合成増加が放射性抵抗性獲得において重要な働きを担っている事、更に細胞内GSHが放射線により誘導される転写因子NF-κBのレドックス制御に深く関わっていることを明らかにした。
|
