| 研究課題/領域番号 |
09771116
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| 研究種目 |
奨励研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
整形外科学
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| 研究機関 | 慶応義塾大学 (1998)
東京女子医科大学 (1997) |
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研究代表者 |
南雲 剛史 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (40237566)
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
1998年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1997年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
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| キーワード | 多核巨細胞 / マクロファージ / cDNAライブラリー / ディファレンシアルディスプレー法 / 細胞融合 / サイトカイン / 接着分子 / 骨巨細胞腫 / 破骨細胞 |
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| 研究概要 |
1、 多核巨細胞のcDNAライブラリーの構築:linker primer法を用いてcDNAを合成、pSPORT1 plasmid vecterをelectroporationにてJM109へ導入し、dDNAライブラリーを構築した。
2、 多核巨細胞で特異的に高発現している遺伝子の同定:
(1) differential hybidization
多核巨細胞とMφのcDNAをそれぞれprobeとして、上記のライブラリーをスクリーニングした.これまでのところ多核巨細胞のprobeと特異的にハイプリダイズするクローンは検出されなかった。mRNA発現量の差が少なく、検出されなかった可能性も考えられた。
(2)differential dispiay
多核巨細胞の形成過程でmRNAを抽出し、蛍光ラベルoligo dT primerで逆転写反応を行い、'5 arbitarilyprimerでPCRを行った。変性アクリルアミドゲル電気泳動し、多核巨細胞形成過程で発現してきたバンドを切り出し、TA cloningを行った。これまでのところシークエンスされたものは、データベースの検索によりIL-6、MMP-9、fusion regulatory protein-1である。Northem blottingで確認すると同時に、さらに新たなバンドを検出、今後もクローニングを進める予定である。
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