| 研究概要 |
PTHrP遺伝子上に存在する3つのプロモーターについて、各プロモーターでの開始による転写産物を特異的に検出するプライマーセットを用いて、RT-PCRを行い、口腔癌細胞HSC-3のPTHrP遺伝子発現における、各プロモーターの使用度を検討した。HSC-3細胞では、3つのプロモーターのうち、最も下流に存在するプロモーター(P3)が高い割合で使われていた。更に、HSC-3細胞に1,25-Dihydroxyvitamin D_3(1,25(OH)_2D_3)(10^<-7>M)、9-cis-retinoic acid(9cRA)(10^<-7>M)を24h作用させたところ、PTHrP遺伝子のP3開始による転写産物が顕著に減少していることが明らかとなった。このことから、HSC-3細胞における、1,25(OH)_2D_3、9cRAによるPTHrP遺伝子発現の抑制には、P3の活性制御が大きく関わっていることが示唆された。また、all-trans-retinoic acidがHSC-3のPTHrP mRNA発現を用量依存的に抑制することが、Northern blot解析により、明らかとなった。
次に、HSC-3細胞から調製したゲノムDNAを用いて、PCRにより、PTHrPのP3領域を含む1.3kbの遺伝子フラグメントを増幅した。
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