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MALDI TOF-MSによるサブピコモルレベル蛋白質構造機能相関分析

研究課題

研究課題/領域番号 09771949
研究種目

奨励研究(A)

配分区分補助金
研究分野 物理系薬学
研究機関熊本大学

研究代表者

三隅 将吾  熊本大学, 薬学部, 助手 (40264311)

研究期間 (年度) 1997 – 1998
研究課題ステータス 完了 (1998年度)
配分額 *注記
1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1998年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1997年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
キーワードミリストイル化 / pp60^<c-src> / MALDI-TOF MS
研究概要

c-src癌遺伝子を発現しているヒト結腸腺癌細胞COLO 320 DMをM期同調化剤としてnocodazole及び,G1/S期同調化剤としてaphidicolinを用いて、各細胞周期に同調化後,各周期の細胞をそれぞれ分画、2次元電気泳動を行い、western immunoblot analysisにより、N-Myr-pp60^<c-src>の細胞内分布を検討した.さらに免疫学的手法及びペパーテクノロジーとMALDITOF-MSを組み合わせた新しい手法を駆使してN-Myr-pp60^<c-src>の分子構造を検討した.その結果、活性型N-Myr-pp60^<c-src>を立体的にかつ特異的に認識できる抗体clone28及びMALDITOF-MSを用いたサブピコモルレベル分析により活性化N-Myr-pp60^<c-src>は、等電点が6.0のタイプのものであった.つまりこの等電点6.0のN-Myr-pp60^<c-src>のTyr527は脱リン酸化を受けていることがわかった.この状態でN-Myr-pp60^<c-src>は,キナーゼ活性を有していることが示唆された. さらに形質膜移行シグナルとしてのミリストイル化を受けた新規生合成N-Myr-pp60^<c-src>は,直ちに細胞質がら膜へと移行した後、M基において再度細胞質に移行することが観察され、このN-Myr-PP60^<c-src>の逆移行には、Heatshock Proteinが関与していることが示唆された.現在、M期におけるN-Myr-pp60^<c-src>の役割について検討中である,

報告書

(2件)
  • 1998 実績報告書
  • 1997 実績報告書
  • 研究成果

    (2件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (2件)

  • [文献書誌] 増田環、三隅将吾、庄司省三等: "細胞周期とN-ミリストイルpp60^<c-src>の細胞内における分布" 生化学. 69. 731- (1997)

    • 関連する報告書
      1998 実績報告書
  • [文献書誌] 増田 環: "細胞周期とN-ミリストイルpp60^<c-src>の細胞内分布" 生化学. 69. 731 (1997)

    • 関連する報告書
      1997 実績報告書

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公開日: 1997-04-01   更新日: 2016-04-21  

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